[发明专利]一种人41型腺病毒(Ad41)包装细胞株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因治疗和重组疫苗领域中一种腺病毒Ad41的包装细胞及其应用。 

背景技术

肠道作为基因治疗的靶器官有诸多优点：(a)给药方式简便，可以直接口服给药或选择内窥镜给药；(b)肠道上皮的表面积大，便于载体的充分吸附和感染；(c)肠道上皮的隐窝细胞是干细胞，对其的感染能延长目的基因的表达时间(Croyle MA，Stone M，Amidon GL，Roessler BJ.In vitro and in vivo assessment of adenovirus41 as a vector for gene delivery to the intestine.Gene Ther，1998，5(5)：645-654.[pubmed：9797869])。粘膜是多数病原微生物入侵机体的第一道屏障，口服给药的疫苗能激发粘膜免疫和系统免疫，是今后疫苗研究的重要方向。 

腺病毒载体(Adenovector，Ad)由于具有遗传稳定、感染细胞效率高、不整合入细胞基因组(安全性好)等优点被广泛用于基因治疗和重组疫苗研究。人F组腺病毒包括Ad40和Ad41两个成员，能引起婴幼儿急性胃肠炎，是天然的肠道病原，被称为肠腺病毒(entericadenovirus)(Tiemessen CT，Kidd AH.The subgroup F adenoviruses.J Gen Virol，1995，76(Pt 3)：481-497.[pubmed：7897343])。研究表明Ad41对胃酸和肠消化液有很强的耐受性，对分化的肠上皮细胞感染能力强，是理想的用于肠道给药的基因治疗载体(Favier AL，Burmeister WP，Chroboczek J.Unique physicochemical properties ofhuman enteric Ad41 responsible for its survival and replication in thegastrointestinal tract.Virology，2004，322(1)：93-104.[pubmed：15063120])。 

前期研究中，发明人从婴幼儿腹泻标本中分离到一株野生型 Ad41病毒，以其基因组DNA为基础，构建了穿梭质粒pSh41-CMV和骨架质粒pAdbone41。利用这2个质粒，能够构建携带目的基因的重组Ad41质粒，腺病毒质粒经限制性内切酶PmeI线性化后，转染293E12包装细胞，能够拯救和扩增重组Ad41病毒。但293E12的病毒包装能力较弱，重组病毒需要扩增10-12代，病毒产量才能达到10¹²颗粒(viral particles，vp)(Lu ZZ，Zou XH，Dong LX，Qu JG，Song JD，Wang M，Guo L，Hung T.Novel recombinant adenovirus type 41vector and its biological properties.J Gene Med，2009，11(2)：128-138.[pubmed：19097028])。 

293细胞是腺病毒Ad5E1区转化的人胚肾细胞，组成型表达Ad5E1基因(包括E1A，E1B19K和E1B55K)。腺病毒E1B55K蛋白具有型特异性，Ad5的E1B55K不能完全替代Ad41E1B55K的生物功能，野生型Ad41在293细胞复制困难，E1区缺失的重组Ad41载体无法在293细胞拯救和包装。