[发明专利]一种获得产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种获得真菌的方法，尤其涉及一种获得产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌的方法。

背景技术

木聚糖酶(1，4-β-D-xylan xylanohydrolase，EC 4.3.2.8)是一种内切糖苷酶，广泛应用于食品、饲料、纸浆和造纸以及生物燃料等工业领域。其中不具有纤维素酶活的木聚糖酶在上述工业领域，尤其是在纸浆和造纸工业领域中具有更重要和广泛的用途，传统的氯漂工艺中有大量的有机氯排放到环境中，并部分残留在纸制品中，严重危害人类健康，以不具有纤维素酶活的木聚糖酶为代表的生物漂白越来越多被人们关注，木聚糖酶的处理可促进纸浆中残余木质素的降解和溶解性木质素的抽除，而其不具有纤维素酶活的性质则避免了漂白过程对纤维素的降解带来纸浆的得率和粘度的降低，在提高纸浆白度的同时，也使得纸张保持了良好的纤维性能。

产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的微生物中，以细菌和放线菌居多，而对于产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌所公开的报道相对较少。真菌在除了产生降解酶外，还具有一个优势，那就是能够通过利用菌丝的生长打开纤维素致密的结构，从而加大纤维素的利用率，所以产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌比细菌更具有利用工业价值。

对于产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌的获得，现有技术中主要通过在获得具有半纤维素酶的真菌后测定其纤维素酶的活性，进而找到不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌，这样目标性不强，且带有偶然性，获得产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌的效率不高。

发明内容

本发明提供一种获得产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌的方法，通过从特定的生物材料中，使用单一性底物培养基，可高效获得产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌。

本发明提供的获得产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌的方法，包括：

1)将从含纤维素和半纤维素生物质原料中筛出的真菌作为待筛的真菌；

2)将上述待筛的真菌分别平行接种在木聚糖固体培养基上和滤纸固体培养基上进行初筛；

3)将初筛得到的能在木聚糖固体培养基上生长，但不能在滤纸固体培养基上生长的真菌作为目标菌株进行复筛：将所述目标菌株分别接种在液体培养基中进行培养，测定该液体培养基中木聚糖酶及与纤维素酶相关的内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和滤纸条酶的活性，能测出木聚糖酶活性，不能测出内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和滤纸条酶的活性的液体培养基中的菌株即为产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌；

所述滤纸固体培养基为以滤纸为唯一碳源的固体培养基，所述木聚糖固体培养基为以木聚糖为唯一碳源的固体培养基，所述液体培养基为含纤维素和半纤维素的生物质原料的液体培养基。

在本发明的一个实施例中，从含纤维素和半纤维素的生物质原料中筛出真菌的方法为：将含纤维素和半纤维素生物质原料在PDA固体培养基上进行一次以上的培养以纯化得到以单菌落方式生长的真菌，所述以单菌落方式生长的真菌即为待筛的真菌。

本发明提供的方法中，所述PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)固体培养基为培养真菌常用的基本培养基；本发明所使用的含纤维素和半纤维素的生物质原料可以是公知的、广义概念上的含纤维素和半纤维素的生物质原料，即，包括所有的含纤维素和半纤维素的植物以及植物的废弃物；特别可以是狭义概念上的含纤维素和半纤维素的生物质原料，即，来自农林业生产过程中除粮食、果实以外的秸秆、树木等含纤维素和半纤维素的部分、农产品加工业下脚料、农林废弃物中含纤维素和半纤维素的物质。优选地，本发明所使用的含纤维素和半纤维素的生物质原料尤其可以选自包括农作物的秸秆、根、茎，木材废弃物或纸浆中的一种或两种以上的组合。含纤维素和半纤维素的生物质原料中含有大量的纤维素和半纤维素，在这些材料上及材料周边的土壤、污水等中含有大量的可以降解它们的微生物，其中既包括产纤维素酶又产木聚糖酶的真菌，也包括产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌。

在本发明的实施例中，优选降解状态的(也可称为腐败状态的，可以是部分腐败的，也可以是全部腐败的)的含纤维素和半纤维素的生物质原料(包括降解的麦秸、降解的玉米秆、降解的高粱秆、降解的甘蔗渣、降解的木材或降解的纸浆中的一种或两种以上的组合)进行培养，这类含纤维素和半纤维素的生物质原料上及其周边土壤、污水等中存在较多活性良好的降解纤维素和半纤维素的微生物，其中既包括产具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌，也包括产不具有纤维素酶活的木聚糖酶的真菌。