[发明专利]一种分离纯化烟草中两种致香前体物的方法

说明书

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，涉及烟草中有效成分的分离纯化技术，具体涉及一种从新鲜烟叶中提取、分离和纯化α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法。

背景技术

α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇是烟草中重要的致香前体物，主要来源于新鲜烟叶和烟花的表面分泌物，在调制后大部分会发生降解，生成重要的致香成分茄酮及其衍生物，对烟叶的香气风格和品质具有决定性影响，是开展烟叶品质研究的关键化学物质之一。另一方面，α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇具有较强的抗肿瘤活性、抑菌和调节植物生长等生物活性，对于尼古丁上瘾也有一定的抑制作用，因此也日益受到越来越多生物化学家和药物化学家的关注。然而，α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的分离纯化较为困难，涉及浸取、萃取、多步柱色谱分离和重结晶等多种技术的联用，工艺操作复杂，制备成本较高，目前国内外尚没有标准品出售，相关科学研究所用纯品多为国外大型烟草公司赞助，技术专属性强，极大地限制了我国相关研究的发展。因此，开展烟草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的分离研究，制备高纯度标准品，对于提高我国相关科学研究水平具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种从新鲜烟叶中提取、分离和纯化α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法。

本发明的两种致香前体物为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇，化学结构式分别如下：

本发明的分离纯化烟草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法，其工艺流程如图1所示，包括以下步骤：

(1)浸取：采用浸洗法萃取新鲜烟叶的表面分泌物，萃取液浓缩至干，得到深褐色浸膏S1。

所述萃取液为二氯甲烷或三氯甲烷。

(2)液-液萃取：采用液-液萃取法得到含西柏烷类化合物的提取液S2。

所述液-液萃取法具体包括如下步骤：将深褐色浸膏S1加入混合萃取溶剂中，超声至浸膏全部溶解后，进行液-液萃取分离，分别收集上层液相和下层液相；然后采用混合萃取溶剂对上层液相和下层液相分别萃取多次，合并所有下层液相的提取液，得到含西柏烷类化合物的提取液S2。

进一步的，所述混合萃取溶剂为正己烷、甲醇和水的混合溶剂，所述正己烷、甲醇和水的体积比为100∶(50-90)∶(10-50)。

更进一步的，所述混合萃取溶剂中甲醇和水的体积比为80∶20，所述甲醇和水的总体积与正己烷的体积相等，即所述正己烷、甲醇和水的体积比为100∶80∶20。

所述对上层液相和下层液相分别萃取多次如至少3次。

(3)正相硅胶柱色谱分离：采用正相硅胶柱对获得的提取液S2进行梯度洗脱，得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S3，所述流动相选用逐渐增加极性的梯度洗脱剂。

所述正相硅胶柱色谱分离具体包括如下步骤：采用正相硅胶柱，选用正己烷和乙酸乙酯作为梯度洗脱剂，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为60∶40-40∶60的洗脱流出液，减压浓缩得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S3。

进一步的，所述正相硅胶柱色谱分离中，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为(45-50)∶(50-55)的洗脱流出液。

优选的，所述正相硅胶柱色谱分离中，对获得的提取液S2进行梯度洗脱，收集体积比为50∶50的洗脱流出液。

所述梯度洗脱剂可采用正己烷和乙酸乙酯的体积比依次为100∶0、75∶25、50∶50、25∶75、0∶100的梯度洗脱剂。

(4)正相氰基柱色谱分离：采用正相氰基制备柱对获得的洗脱液S3进行梯度洗脱，得到主要物质为α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的洗脱液S4，所述流动相选用逐渐增加极性的梯度洗脱剂。