[发明专利]真菌单个孢子的分离方法

权利要求书

1.真菌单个孢子的分离方法，其特征在于：是通过以下方法实现的：

1.a.根据待分离孢子的大小选择内径在0.02-1mm之间长度为100mm的硬质中性玻璃毛细管，同时备用尖端细长带胶头的玻璃巴斯德吸管以及普通载玻片和蒸馏水，将上述设备及蒸馏水进行高压蒸汽灭菌；

1.b.将玻璃毛细管从尖端插入巴斯德吸管中，留一段在巴斯德吸管外，用Parafilm封口膜将巴斯德吸管尖端管口处封闭；

1.c.用解剖针挑取部分待分离的真菌材料，真菌病害病斑组织或大型真菌菌褶或真菌菌落，置于已消毒的载玻片上，滴加无菌水分散孢子，在复式显微镜或解剖镜下，调整视野使单个孢子清晰可见；

1.d.将巴斯德吸管的胶头捏下并保持不动，在复式显微镜或解剖镜下，将毛细管管口接近待分离的单个孢子，并使毛细管管口中心正对并接近孢子，松动胶头，将孢子吸入毛细管中，保持胶头不动；

1.e.取备用的培养基，转移孢子至培养基上方，捏下胶头将孢子吹到培养基表面，操作过程中如有污染，便更换玻璃毛细管，操作结束后拆卸玻璃毛细管，将巴斯德吸管与毛细管分别保存，真菌单个孢子的分离完成，培养基选用PDA培养基或SDA培养基或MEA培养基或选择培养基。

2.根据权利要求1所述的真菌单个孢子的分离方法，其特征在于：是通过以下方法实现的：

2.a.根据待分离的孢子大小备用内径为0.1mm、长度为100mm的硬质中性玻璃毛细管若干根，尖端细长带胶头的玻璃巴斯德吸管一支，25.4×76.2mm的普通载玻片和20ml蒸馏水，将上述设备及蒸馏水在121℃下高压蒸汽灭菌20min；

2.b.将玻璃毛细管从尖端插入巴斯德吸管中，留20mm长度在吸管外，用Parafilm封口膜将吸管尖端管口处封闭；

2.c.取一支解剖针，在酒精灯火焰上将针头烧红灭菌，待解剖针冷却后，挑取部分待分离的真菌材料，选取链格孢菌落和青霉菌落，置于已消毒的载玻片上，滴加一滴无菌水使孢子分散开，在复式显微镜或解剖镜下，调整视野使单个孢子清晰可见；

2.d.单手持巴斯德吸管和玻璃毛细管，拇指和食指捏巴斯德吸管胶头，中指和无名指夹持吸管的下端，手指不要接触毛细管，将巴斯德吸管的胶头捏下并保持不动，在复式显微镜或解剖镜下，将毛细管管口接近待分离的单个孢子，并使管口中心正对并接近孢子，松动胶头，将单个孢子吸入毛细管中，保持胶头不动，注意不要使孢子进入吸管内；

2.e.取备用的PDA培养基，手持巴斯德吸管和玻璃毛细管转移孢子至PDA培养基上方，捏下胶头将孢子吹到PDA培养基表面，操作过程中如有污染，便更换玻璃毛细管，操作结束后拆卸玻璃毛细管，将巴斯德吸管与毛细管分别保存，真菌单个孢子的分离完成。