[发明专利]一种临床用干细胞保存液

说明书

(一)技术领域

本发明属于生物医学领域，特别涉及一种临床用干细胞保存液。

(二)背景技术

近年来，干细胞的研究进展迅速，干细胞的功用正日益受到生命科学的重视，已经显示出其在生命科学多个领域的广泛应用前景。干细胞疗法也日益广泛的应用于临床治疗，便应运而生了一种新的医学治疗技术，即干细胞技术；目前干细胞技术已在心血管系统疾病、神经系统疾病、肌肉骨骼相关疾病、糖尿病等多种疾病的治疗中取得了令人振奋的效果，展示了广阔的临床应用前景。

然而，干细胞不同于普通的生物制品和药品，它是具有生命活性的生命最基本单位，在干细胞的广泛应用过程中，干细胞活性的保存，简称干细胞的保存是一个重要的挑战。用生理盐水保存干细胞10小时之内干细胞的活性丧失就达到30％之多。目前的研究表明，干细胞可以用一种冻存液在零下100多度中长期保存几十年，复苏后仍保持其良好的活性状态、干细胞特征及功能，该种保存液的主要成分是血清和二甲基亚砜(DMSO)，然而DMSO具有细胞毒性，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性，如果低温保存的细胞复苏后直接医用，过多的DMSO对人体具有毒性，并且这种传统的冻存液要求在超低温下保存，移植前需要复苏等过程，给应用带来很多不便。因此，处于干细胞移植的安全性及方便性考虑，急需研究出一种新的安全方便的干细胞的保存液，保证其更能接近细胞的体内生存微环境，包括渗透压、pH值及营养物质等。

(三)发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种维持干细胞活性、无毒副作用的临床用干细胞保存液。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种临床用干细胞保存液，其特征在于：所述保存液主要由人病毒灭活血浆和氨基酸组成，其中血浆的浓度为50～100％。

本发明利用血浆本身蛋白丰富、渗透压及酸碱度接近干细胞体内生存微环境等特点，将其作为干细胞保存液。

人血浆作为血液的重要组成成分，主要由水分、蛋白及无机盐构成，水分占90～92％，血浆中含有多种蛋白，总称为血浆蛋白，是构成血浆的主要溶质成分，以维持血浆胶体渗透压，组成血液缓冲体系，参与维持血液酸碱平衡，运输营养和代谢物质，血浆蛋白质为亲水胶体，许多难溶于水的物质与其结合变为易溶于水的物质；血浆蛋白分解产生的氨基酸可用于合成组织蛋白质或氧化分解供应能量，参与凝血和免疫作用等；血浆的无机盐主要以离子状态存在，正负离子总量相等，保持电中性，这些离子在维持血浆渗透压、酸碱平衡以及神经-肌肉的正常兴奋性等方面起着重要作用；血浆就相当于结缔组织的细胞间质，为体内细胞的存活、增殖及其他的新陈代谢活动提供了一种理想的生存内环境。

本发明的更优方案为：

所述血浆保存液中添加有氨基酸，氨基酸浓度为1％。

氨基酸是构成生物体蛋白质的最基本单位，是生命机体的重要物质基础，每一个细胞的重要组成部分都有氨基酸的参与，所以氨基酸与生物的生命活动有着密切的关系，细胞的一切生命活动都需要氨基酸的参与，包括细胞的存活、增殖等等。

通过实验表明，随着血浆浓度的升高，细胞活性降低幅度也逐渐减小，所以为了更长时间的保存细胞活性，所述血浆的浓度为100％。

所述保存液在保存干细胞时置于4℃的环境下放置，而无需超低温保存。

本发明可直接用于临床，能够较长时间的维持干细胞的活性，无毒副作用，并且无需超低温保存，适于广泛推广应用。

(四)附图说明

图1为不同血浆浓度对干细胞活度的影响示意图；

图2为氨基酸和碳酸氢钠对干细胞活度的影响示意图。

(五)具体实施方式

实施例：

1.所需试剂：人病毒灭活血浆、复方氨基酸、碳酸氢钠注射液、台盼蓝

2.五种血浆浓度的保存液的配制：将病毒灭活血浆和生理盐水按体积比，分别配制成100％血浆保存液、70％血浆保存液(血浆∶生理盐水＝7∶3)、50％血浆保存液(血浆∶生理盐水＝5∶5)、20％血浆保存液(血浆∶生理盐水＝2∶8)、100％生理盐水。

3.临床用干细胞的制备及活度检测：

选择第三代的干细胞，细胞达到80％汇合时，消化制备成单个细胞，并清洗掉细胞培养基等非临床用试剂，台盼蓝染色其存活度为96.0％。

4.干细胞的保存：按照1～2×10⁷/ml的浓度，分别用上述保存液悬浮离心沉淀的干细胞，混匀制备成悬液储存于无菌保存管内置于4℃保存。