[发明专利]高稳定性的具抗体结合能力的重组蛋白A及其生产

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域；更具体地，本发明涉及高稳定性的具抗体结合能力的重组蛋白A及其生产。

背景技术

蛋白A(Protein A)来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，为其表面的一种膜蛋白。蛋白A具有与抗体特异性结合的能力，蛋白A亲和层析柱已成为生物技术领域应用广泛的纯化抗体的亲和柱，可从腹水，血清和细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。蛋白A可以通过基因工程重组技术生产。

但是，目前市场销售的蛋白A具有不稳定的缺陷，从而影响其使用。本领域还需要进一步优化蛋白A及其生产技术，以提高其稳定性以及抗原结合能力，进而提高其应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的高稳定性的具抗体结合能力的重组蛋白A及其生产方法。

在本发明的第一方面，提供一种具抗体结合能力的重组蛋白A，其是：

(a)SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白；或

(b)由(a)所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸(如1-10个，较佳地1-5个，更佳地1-3个)且具有(a)限定的蛋白相同的功能的由(a)衍生的蛋白。

在另一优选例中，所述的缺失或添加发生在蛋白的羧基端、氨基端或者二者兼有。

在本发明的另一方面，提供一种多核苷酸，其选自下组：

(i)编码所述的具抗体结合能力的重组蛋白A的多核苷酸；或

(ii)与(i)中的多核苷酸互补的多核苷酸。

在另一优选例中，该多核苷酸编码SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的蛋白。

在另一优选例中，该多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

在本发明的另一方面，提供一种载体，它含有所述的多核苷酸。

在本发明的另一方面，提供一种遗传工程化的宿主细胞，它含有所述的载体，或基因组中整合有所述的多核苷酸。

在本发明的另一方面，提供一种生产所述的具抗体结合能力的重组蛋白A的方法，包括步骤：

(1)培养所述的宿主细胞，获得培养物；和

(2)从培养物中分离所述的具抗体结合能力的重组蛋白A。

在另一优选例中，在温度20±10℃下培养所述的宿主细胞。

在另一优选例中，在温度20±7℃下培养所述的宿主细胞；更佳地在温度20±5℃下培养所述的宿主细胞；更佳地在温度15±3℃下培养所述的宿主细胞。

在另一优选例中，所述的宿主细胞是大肠杆菌细胞，培养所述宿主细胞过程中采用IPTG或乳糖诱导表达。

在另一优选例中，采用0.05-2.0mM浓度的IPTG诱导表达。

在本发明的另一方面，提供所述的具抗体结合能力的重组蛋白A的用途，用于结合抗体；或用于制备抗体亲和柱；或用于抗体的纯化。

在本发明的另一方面，提供一种纯化抗体的亲和柱，其包括亲和介质，以及附着于所述亲和介质的所述的具抗体结合能力的重组蛋白A。

在另一优选例中，所述的亲和介质选自(但不限于)：琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素、大孔吸附树脂等。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、左图为金黄色葡萄球菌基因组抽提结果；右图为全长SPA(FL)与截短体SPA(32-327)PCR产物的电泳鉴定结果。图中SPA-32指截短体SPA(32-327)。

图2、菌落PCR鉴定结果。

图3、将该重组表达载体转化入感受态的大肠杆菌BL21(DE3)，并进行诱导表达。

其中，Lane1：诱导前；Lane2，3，4，5：0.5mM IPTG诱导后。

图4左图：SDS-PAGE检测在不同的温度条件下培养重组SPA(32-327)BL21(DE3)细胞，获得的培养上清和包涵体形式蛋白的表达情况。

图4右图：为SDS-PAGE检测在不同的诱导条件下培养重组BL21(DE3)细胞中蛋白的表达情况。其中Lane 1：诱导前；Lane 2：0.1mM IPTG；Lane 3：0.5mM IPTG；Lane 4：1.0mM IPTG；Lane 5：10mM IPTG。Sup：上清；Pel：沉淀。