[发明专利]一种艾滋病检测质控血清的配制方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域。具体涉及一种艾滋病检测质控血清的配制方法。

背景技术

艾滋病是严重危害人类健康的超级瘟疫，它是由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的。目前艾滋病的检测使用最广泛的方法是酶联免疫吸附实验（ELISA）。但是，ELISA法在实际中受很多因素影响,易导致检测结果出现偏差,为了提高每次实验的准确性,在HIV检测过程中需要设立质控对照，通过对质控血清的检测值的变化进行监测，从而判断每次实验的可靠性和重复性。因此，质控血清的质量和准确性是保证艾滋病检测可靠性的关键技术环节。

目前HIV检测中使用的质控对照通常为临界值质控血清，这种血清很难从临床直接获得，因此，一般采用HIV强阳性血清进行稀释配制。配制的方法一般为：通过反复稀释，并进行检测其S/CO值(检测吸光度S与检测限cutoff的比值)，直到其S/CO值达到预定值左右。由于ELISA方法在S/CO值达到预定值时具有极高的敏感性，因此这种方法的弊端就是需要反复进行摸索稀释倍数和进行检测，直到其检测值恰巧可以落在想要的范围内。需要耗费很多的时间、人力和检测费用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种艾滋病检测质控血清的配制方法。该方法简单易行，减少步骤和各种损耗，并且减少反复摸索稀释的盲目性和不可控性。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

通过大量检测实验数据和数学模型分析，本发明人得出了以下结论：（1）临床获得的HIV强阳性血清的检测信号值远远超出了现有常规ELISA定性检测方法和仪器的上限，需要进行千倍以上的稀释才能进入检测信号有效区间。（2）当取反应OD值（样本检测OD值-阴性对照OD值）作为反应信号代替S/CO值时，在一定范围内，反应OD值与血清待检靶物质的浓度具有良好的线性回归关系，其回归曲线是一条截距近似为0的直线，可以统一表示为“Y=aX”其中Y代表反应OD值，X代表待检物浓度。

基于上述论理，本发明提供了一种艾滋病检测质控血清的配制方法：该方法包括以下步骤：

（1）选择阳性血清：

所选用HIV阳性血清样本需经ELISA检测为强阳性，并经蛋白质印迹（以后简称：Western Blot）确证；

（2）选择和处理阴性血清

选用正常人血清，该血清为HIV抗体阴性、HBsAg阴性、HCV抗体阴性，并且无肉眼可见的溶血、黄疸、乳糜颗粒、絮状沉淀物；

将上述阴性血清灭活补体，除菌备用；

（3）最终稀释倍数的确定：

a. 第一步稀释

用处理后的阴性血清对HIV阳性血清进行10，100，1000……10×梯度稀释，并对各稀释样本进行ELISA检测，测得各样本的OD值，找出样本OD值相对于原阳性血清出现明显下降的稀释倍数，即该稀释倍数为第一步稀释倍数，该样本作为下步稀释的母液；

b. 第二步稀释

对上步获得的母液再进行2, 4, 8……2×系列稀释，并对各稀释样本进行ELISA检测，测得各样本的OD值，计算出S/CO值和反应OD值，确定第二步稀释倍数，具体方法为：

当2×系列稀释的样本中某一稀释倍数样本获得的S/CO值恰巧为所需配制的数值，直接采用该稀释倍数为第二步稀释倍数；

当2×系列稀释的样本中没有S/CO值没有出现所需配制的数值，则进行以下计算：

(ⅰ) 选一个OD值在2.0以下，S/CO值最接近所需配制数值的稀释倍数，上下均可；

(ⅱ) 计算所选稀释倍数的反应OD值，所述反应OD值=该稀释倍数对应的样本OD值-阴性对照OD值；

(ⅲ) 计算所需配制S/CO值的质控血清的反应OD值，所述反应OD值=所需配制的S/CO值×cutoff值-阴性对照OD；

(ⅳ) 根据以下公式计算第二步稀释倍数:

X2=X1*Y1/Y2

其中，X2：第二步稀释倍数

X1：步骤(ⅰ)中所选的S/CO值最接近所需配制值的稀释倍数

Y1：步骤(ⅱ)所得的反应OD值

Y2：步骤(ⅲ)所得的反应OD值

c. 最终稀释倍数=第一步稀释倍数×第二步稀释倍数；

（4）稀释分装

将选定的阳性血清和阴性血清，按照步骤（3）确定的最终稀释倍数在无菌条件下进行稀释，稀释后搅拌过夜，充分混匀，分装于冻存管中备用。

上述方法中，所述阳性血清优选为Western Blot全条带的样本，并且是将几份HIV强阳性血清混合物。