[发明专利]热带假丝酵母细胞及其用途

说明书

技术领域

本发明的主题是基因工程改性的热带假丝酵母(Candida tropicalis)细胞、其用途以及用于制备ω-羟基-羧酸和ω-羟基-羧酸酯的方法。

技术状态

热带假丝酵母能够用链烷烃生成二羧酸，是一种具有良好特征的子囊菌。

WO91/006660描述了在β-氧化过程中通过中断POX4和/或POX5基因而完全抑制的热带假丝酵母细胞，其可提高a，ω-二羧酸的收率。

WO00/020566描述了热带假丝酵母的Cytochrom P450单加氧酶和NADPH Cytochrom P450氧化还原酶，以及将其用来干预ω-羟基化反应，ω-氧化反应的第一步骤。

WO03/089610描述了热带假丝酵母菌产生的、可催化ω-氧化反应的第二步骤使脂肪醇转变为醛的酶，以及将其用来提高二羧酸的产量。

迄今为止所述的这些细胞和方法并不适合用来制备ω-羟基-羧酸或者其酯，因为ω-羟基-羧酸仅仅短时间以中间产物形式存在，并且立即将其代谢。

ω-羟基-羧酸及其酯可作为聚合物的前体物质，是很经济的化合物，因此本发明适合于商业应用。

发明内容

本发明的任务在于，寻找一种能够以发酵方式、特别是在细胞周围的介质中，制备足量的ω-羟基-羧酸或ω-羟基-羧酸酯的方法。

本发明的说明

令人惊奇地发现，以下所述的细胞有助于解决这任务。

因此本发明的主题是一种如权利要求1所述的细胞。

本发明进一步的主题是本发明所述细胞的用途，以及本发明所述的细胞用于制备ω-羟基-羧酸和ω-羟基-羧酸酯的方法。

本发明的优点是能够将所用的离析物(Eduktes)转变成ω-羟基-羧酸和相应的酯，且该方法的特异性很高，因此相对于所用离析物的收率很高。

本发明的一个主题是一种尤其源自ATCC 20336菌株的热带假丝酵母细胞，其特征在于，所述细胞与其野生型相比至少一种酶的活性有所降低，可通过选自以下两组没有内含子的核酸序列对所述的酶进行编码：

A)序列号1、序列号3、序列号5、序列号7、序列号9、序列号11、序列号13、序列号15、序列号17、序列号19、序列号21、序列号23、序列号25、序列号27、序列号29、序列号31、序列号33、序列号35、序列号37、序列号39、序列号41、序列号43、序列号45、序列号47、序列号49、序列号51、序列号53、序列号55、序列号57、序列号59、序列号61、序列号63、序列号65和序列号67；尤其是序列号1、序列号3、序列号5、序列号7、序列号9、序列号11、序列号13、序列号15、序列号17、序列号19、序列号21、序列号23、序列号25、序列号27、序列号29、序列号31、序列号33、序列号35、序列号37、序列号39、序列号41、序列号43、序列号45、序列号47、序列号49和序列号51；更特别是序列号1、序列号3、序列号5、序列号7、序列号9、序列号11、序列号13、序列号15、序列号17、序列号19、序列号21、序列号23、序列号25和序列号27，

B)与以下序列号的序列至少80％一致、特别优选至少90％一致、特别适宜优选至少95％一致、最优选至少99％一致的一种序列：序列号1、序列号3、序列号5、序列号7、序列号9、序列号11、序列号13、序列号15、序列号17、序列号19、序列号21、序列号23、序列号25、序列号27、序列号29、序列号31、序列号33、序列号35、序列号37、序列号39、序列号41、序列号43、序列号45、序列号47、序列号49、序列号51、序列号53、序列号55、序列号57、序列号59、序列号61、序列号63、序列号65和序列号67；尤其是序列号1、序列号3、序列号5、序列号7、序列号9、序列号11、序列号13、序列号15、序列号17、序列号19、序列号21、序列号23、序列号25、序列号27、序列号29、序列号31、序列号33、序列号35、序列号37、序列号39、序列号41、序列号43、序列号45、序列号47、序列号49和序列号51；更特别是序列号1、序列号3、序列号5、序列号7、序列号9、序列号11、序列号13、序列号15、序列号17、序列号19、序列号21、序列号23、序列号25和序列号27。本发明所述的优选核酸序列组是组A)。