[发明专利]利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法

权利要求书

1.一种利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法，该方法包括：

肠球菌分离纯化步骤，在该步骤中，选择合适梯度体积的粪便样本，以带栅格纤维滤膜和肠球菌选择性琼脂培养基为基质，在36±1℃下培养2天后挑取符合肠球菌形态特征的菌落进行2～3次纯化，对经生化鉴定后确定为肠球菌的菌株进行保存；

已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的建立与分析步骤，在该步骤中，采用琼脂扩散法，以MH琼脂培养基为基质，检测肠球菌对10种常用抗生素的抗药性，以“1”表示抗药，“0”表示敏感表示各菌株的抗药表型，即各菌株的抗生素抗性指纹，构建已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库，采用数据分析软件对图谱库进行判别分析；

海洋水体粪便污染溯源分析步骤，在该步骤中，采用数据分析软件，将从海洋水体样本中分离得到的未知源肠球菌的抗生素抗性指纹与已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库进行比对，依据相似性大小排序确定其最大可能来源，并据此对采样海域水体中的粪便污染进行溯源。

2.根据权利要求1所述的利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法，其中在肠球菌分离纯化步骤中对肠球菌进行生化鉴定时，对每株菌均需进行接触酶实验、10℃和45℃生长验证实验、耐高盐实验、耐高pH实验、牛奶中0.1％亚甲基蓝还原性实验共6种实验，对6种实验要求均完全满足的为肠球菌。

3.根据权利要求1中所述的利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法，其中在已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的建立与分析步骤中，选用的常用抗生素为青霉素G、四环素、利福平、万古霉素、红霉素、呋喃妥因、氯霉素、环丙沙星、磷霉素、高浓度庆大霉素共10种，本步骤要求检测每株菌株对全部10种抗生素的抗药表型，并进行抗药性结果判读。

4.根据权利要求1所述的利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法，其中在已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的建立与分析步骤中，应用数据分析软件，采用判别分析法对图谱库进行分析，以源验证和交叉验证得到的平均正确归类率评估肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的归类准确性。

5.根据权利要求1所述的利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法，其中在海洋水体粪便污染溯源分析步骤中，采用判别分析法进行未知源菌株的归类识别。