[发明专利]一株海洋来源真菌及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一株海洋来源真菌Penicillium sp.701，及其在微生物发酵制备喹啉生物碱的二聚物盐中的应用。

(二)背景技术

海洋中蕴藏着丰富的微生物资源，高盐、高压、低温、特殊光照、寡营养等生存环境特征决定了海洋微生物的特殊代谢方式，次级代谢产物结构复杂、多样。海洋真菌是指一类在海洋、咸水或河口环境中生长并形成孢子繁殖的真菌，多数附生、共生在海洋动植物或漂流木中。海洋真菌作为海洋微生物的一个重要组成部分，近年来成为开发新生物活性物质的新资源，能产生丰富的生物活性次级代谢产物，如萜类、肽类、生物碱类和酯类等，许多化合物具有一定的抗菌、细胞毒、抗氧化、抗肿瘤、抗滤过性病原体、酶抑制等活性，因此许多海洋天然产物具有巨大的潜力用于开发新药。

(三)发明内容

本发明目的是提供一株海洋来源真菌Penicillium sp.701，及其在微生物发酵制备喹啉生物碱的二聚物盐中的应用。

本发明采用的技术方案是：

一株海洋来源真菌——青霉属(Penicillium sp.)ENP701，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号：CCTCC No：M2010088，保藏日期：2010年4月19日。

该菌株从中国东海北纬28.2690度、东经121.6047度海域的海水中分离得到。其菌体照片见图1，菌落特征如下：菌落呈白色且略带青色，被散毛的，紧贴于培养基。种子液移至三角瓶中培养，真菌则长成许多球状的菌丝体，直径1～2cm不等，悬浮于培养液中。

本发明还涉及所述的海洋来源真菌在微生物发酵制备喹啉生物碱的二聚物盐中的应用，所述喹啉生物碱的二聚物盐结构如式(I)所示：

上述喹啉生物碱的二聚物盐采用MTT法进行人肺癌细胞H460体外抑制实验，半抑制率浓度(IC₅₀)为19.38±0.15μg/ml，提示该化合物可能是潜在的抗肿瘤药物。

具体的，所述应用方法如下：将所述Penicillium sp.701在适用于海洋来源真菌的发酵培养基进行发酵培养，于培养后的菌体中获得所述喹啉生物碱的二聚物盐。所述适用于海洋来源真菌的发酵培养基可选择本领域常规适用于海洋来源真菌的培养基，例如人工海水GYT培养基，于菌体中获得所述喹啉生物碱的二聚物盐的方法可按照本领域常规方法进行，比如按照CN201010109785.8中的方法进行分离。

优选的，为进一步提高菌株发酵产率，所述发酵培养基每100mL组成如下：葡萄糖0.5～2.0g，NaNO₃ 0.1～0.5g，酵母膏0.05～0.5g，人工海水50～60mL，蒸馏水补足至100mL，pH6.0～7.0。

所述人工海水每100ml组成为：NaCl 2.448g，Na₂SO₄ 0.3917g，KCl0.0664g，KBr 0.0096g，SrCl₂ 0.0024g，MgCl·6H₂O 0.4981g，CaCl₂·H₂O0.1102g，NaHCO₃ 0.0192g，H₃BO₃ 0.0026g，NaF 0.0004g，蒸馏水100ml。

液体发酵技术属于现代生物技术之一。深层发酵技术直接生产菌体，同时获得富含代谢产物的发酵液。菌体深层发酵技术研究的关键是培养基，不同代谢产物产量的提高需要不同的培养基进行培养，因此，培养基的选择与配制是深层发酵技术的关键，培养基配方的合理性，直接影响到发酵产率和生产成本。本发明通过反复试验和筛选，获得了适用本发明菌株的最佳培养基配方，可大大提高菌株发酵产率。

更为优选的，所述发酵培养基每100mL组成如下：葡萄糖1.0g，NaNO₃0.22g，酵母膏0.1g，人工海水60mL，蒸馏水补足至100mL，pH6.5。

本发明的有益效果主要体现在：提供了一株能够产生具有抗肿瘤活性的喹啉生物碱二聚物盐的海洋来源真菌，并对其发酵条件进行了优化，为新药研发提供了基础。

(四)附图说明

图1为ENP701菌体照片(放大100倍)；

图2为不同碳源对特定微量活性代谢产物的影响；

图3为不同氮源对特定微量活性代谢产物的影响；

图4为不同PH对特定微量活性代谢产物的影响。

(五)具体实施方式