[发明专利]一种从水稻种子中分离纯化重组人血清白蛋白的方法

权利要求书

1.一种从水稻种子中分离纯化重组人血清白蛋白的方法，依次包括步骤：

1)将重组人血清白蛋白粗提取物经阳离子交换层析，得到初级产物I；

2)将初级产物I经阴离子交换层析，得到中级产物II；

3)将中级产物II经疏水层析，得到纯化的重组人血清白蛋白目标物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中阳离子交换层析的填料选自UNOSphere S、Capto MMC、Nuvia S和MacroPrep-CM。

3.根据权利要求2所述的方法，其中阳离子交换层析的填料为UNO Sphere S。

4.根据权利要求1所述的方法，其中阴离子交换层析的填料选自Q Sepharose FF、UNO Sphere Q和DEAE sepharose FF。

5.根据权利要求4所述的方法，其中阴离子交换层析的填料为Q Sepharose FF。

6.根据权利要求1所述的方法，其中疏水层析的填料选自Phenyl sepharose HP、Phenyl sepharose FF、macro-prep t-butyl 和macro-prep methyl。

7.根据权利要求6所述的方法，其中疏水层析的填料为Phenyl sepharose HP。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组人血清白蛋白粗提取物是通过下述方法制备，包括步骤：

i)将含有重组人血清白蛋白的转基因稻米与提取缓冲液按重量/体积比(kg/l)1∶5混合，在55～60℃下提取1～1.5小时；提取缓冲液包含10～30mM磷酸盐缓冲液、10～20mM醋酸钠、15～30mM硫酸铵与5～20mM辛酸钠，其pH为6.5～8；

ii)将步骤i)的提取混合物的pH调节至4.0～4.5，并沉淀3～12小时；

iii)过滤步骤ii)的混合物，收集滤液，获得含有高浓度重组人血清白蛋白的粗提溶液；所述过滤包括用滤布式板框压滤机压滤，接着用中空纤维膜微滤；所述中空纤维膜为孔径0.20μm～0.45μm的聚醚砜材质中空纤维膜。

9.根据权利要求1所述的方法，其中阳离子交换层析中使用的上样缓冲液包括醋酸盐缓冲液，其pH小于5.0。

10.根据权利要求1所述的方法，其中阳离子交换层析中使用的洗脱目标物的缓冲液包括醋酸盐缓冲液和氯化钠，或者磷酸盐缓冲液和氯化钠；缓冲液的pH为5.0～6.7。

11.根据权利要求2所述的方法，其中当阳离子交换层析的填料为UNOSphere S时，使用的缓冲液包括醋酸盐缓冲液、0.25M氯化钠，pH5.2。

12.根据权利要求2所述的方法，其中当阳离子交换层析的填料为Nuvia S时，洗脱缓冲液包括醋酸盐缓冲液、0.25M氯化钠，pH5.0。

13.根据权利要求2所述的方法，其中当阳离子交换层析的填料为CaptoMMC时，洗脱杂质使用的缓冲液包括醋酸盐缓冲液、1M氯化钠，pH4.7；洗脱目标物使用的缓冲液包括磷酸盐缓冲液，1M氯化钠，pH6.7。

14.根据权利要求2所述的方法，其中当阳离子交换层析的填料为MacroPrep-CM时，洗脱杂质使用的缓冲液包括醋酸盐缓冲液、1M氯化钠，pH4.7；洗脱目标物使用的磷酸盐缓冲液，0.1M氯化钠，pH6.5。

15.根据权利要求4所述的方法，其中当阴离子交换层析的填料为QSepharose FF时，使用的缓冲液包括磷酸盐缓冲液，0.25M氯化钠。

16.根据权利要求4所述的方法，其中当阴离子交换层析的填料为DEAEsepharose FF时，洗脱杂质使用的缓冲液包括磷酸盐缓冲液，0.1M氯化钠，洗脱目标物使用的缓冲液包括磷酸盐缓冲液，0.25M氯化钠。

17.根据权利要求6所述的方法，其中在疏水层析中，待纯化的含有重组人血清白蛋白的样品中硫酸铵的浓度为0.1M～1M。

18.根据权利要求6所述的方法，其中当疏水层析的填料为Phenyl sepharoseHP时，待纯化的含有重组人血清白蛋白的样品中硫酸铵的浓度为0.4M。