[发明专利]从中药材圆锥铁线莲中分离纯化活性成分金色酰胺醇酯的方法

说明书

技术领域

本发明是关于中药有效成分的提取分离方法，具体涉及一种从药用植物圆锥铁线莲中分离纯化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法。

背景技术

圆锥铁线莲(Clematis terniflora DC.)系毛茛科（Ranunculaceae）铁线莲属（Clematis）植物，用于治疗扁桃体炎、咽喉炎以及风湿和类风湿性关节炎等，在日本做为中药威灵仙替代品使用，其地上部分在浙江北部地区广泛用于呼吸系统和泌尿系统炎症、肿瘤的治疗，特别是对慢性咽炎和慢性前列腺炎疗效甚佳；其地上部分的药理研究证明，黄酮及木脂素类成分具有显著的生理活性。圆锥铁线莲在民间用药中对于炎症反应和肿瘤所表现出的确切疗效激发了我们进一步研究其生物活性成分的兴趣。在药理活性相关实验的指导下，我们首次在圆锥铁线莲中分离纯化得到一种药效成分金色酰胺醇酯，此成分有文献报道具有很好的抗炎镇痛活性，其抗炎机制是通过选择性的抑制组织蛋白酶L和B来实现（Koneni V. Sashidhara, Jammikuntla N. Rosaiah,  Ethika Tyagi, Rakesh Shukla, Ram Raghubir, Siron M. Rajendran. Rare dipeptide and urea derivatives from roots of Moringa oleifera as potential anti-inflammatory and antinociceptive agents. European Journal of Medicinal Chemistry, 2009, 432-436.; Kengo Isshiki, Yasuyuki Asai, Sumiko Tanaka, Maki Nishio, Tomofumi Uchida, Toru Okuda, Saburo Komatsubara, Naoki Sakurai. Aurantiamide acetate, a selective cathepsin inhibitor, produced by Aspergillus penicilloides. Biosci. Biotechnol. Biochem., 2001, 1195-1997.）。此外，我们选择神经胶质瘤细胞U251和U87对金色酰胺醇酯进行了初步体外药理筛选，结果表明金色酰胺醇酯具有一定的抗肿瘤活性，其对U251和U87抑制的IC50均为25μM，金色酰胺醇酯对U251和U87的抑制机制是通过诱导肿瘤细胞产生自噬来实现的。本发明提供一种从中药圆锥铁线莲中分离纯化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法，此方法得到的金色酰胺醇酯纯度较高，其产率（纯品质量/药材质量）可达到0.001%～0.1%。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种从药用植物圆锥铁线莲中分离纯化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法。

从药用植物圆锥铁线莲中分离纯化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法的步骤如下：

A：将新鲜采摘的毛茛科圆锥铁线莲药材全草或茎叶于室温下阴干，切段，加入2～50倍体积份浓度为1%～100%的乙醇，采用冷浸、渗漉、煎煮、超声、加热回流或微波进行提取，提取时间为0.1～5小时，过滤，药渣用上述方法再提取2～10次，合并提取液，回收乙醇，得到总提物浸膏；

    B：取步骤A中总提物浸膏用1～20倍体积份的水稀释，上装有非极性、弱极性或中极性中的任意一种大孔树脂分离柱进行纯化，大孔树脂用量为药材量的2～40倍重量份，分离柱的径高比为1：3～30，吸附流速为1～10BV/h；先用体积比为0.1%～50%的乙醇和水洗脱1～20BV，流速1～20BV/h；再用体积比为50%～100%的乙醇和水洗脱1～30BV，流速1～30BV/h，收集体积比为50%～100%的乙醇和水洗脱部分，回收乙醇，得到总提物纯化部分；

C：取步骤B中总提物纯化部分，拌入1～10倍重量份100～200目硅胶，将溶剂挥干得到拌样硅胶；另取10～100倍重量份100～200目硅胶，干法装柱，径高比为1:3～30，将拌样硅胶加入柱顶，上加硅胶做保护层，以氯仿-甲醇混合溶剂系统进行梯度洗脱，收集体积比为99:1～50:50的氯仿和甲醇洗脱液部分，薄层检识。薄层色谱条件为：正向硅胶G预制板；展开剂为99:1～80:20的氯仿-甲醇。合并并回收洗脱溶剂，得到浓缩物；