[发明专利]一种微生物发酵制备阿卡波糖的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵制备阿卡波糖的方法，所述的方法为：将阿卡波糖产生菌CCTCC NO：M 209022，接种至适用于所述菌株的含碳源、氮源、无机盐的发酵培养基中，在温度20～32℃进行发酵培养96～192小时，发酵结束后，得发酵液提取分离，得到所述阿卡波糖，其特征在于，发酵培养进行0～48h之间，加入如式II所示的有效霉素A的水溶液，使每升发酵培养基中加入有效霉素A的质量为0.04～0.4g；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述有效霉素A的水溶液的浓度为1～100g/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于在发酵培养进行0～12h之间，加入如式II所示的有效霉素A的水溶液，所述有效霉素A的水溶液的加入方式为下列之一：(1)一次性加入；(2)分批间歇加入；(3)流动连续加入。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基中，所述的碳源为下列之一或几种任意组合：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、糊精、淀粉、甘油、甘露醇、山梨醇；所述的氮源为下列之一或几种任意组合：肉汁、酵母膏、干酵母、大豆粉、玉米浆、蛋白胨、尿素、氨盐，肽；所述的无机盐为下列之一或几种任意组合：Na盐、K盐、Ca盐、Mg盐、Fe盐、Mn盐、Zn盐、Co盐或Ni盐。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基还含有氨基酸类、维生素和/或核酸类物质。

6.如权利要求1、4或5所述的方法，其特征在于所述发酵培养基初始pH值为pH 6.0～8.0。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基组成如下：麦芽糖80.0g/L，葡萄糖20.0g/L，黄豆饼粉10.0，g/L，玉米浆5.0g/L，FeCl₃ 0.1g/L，CaCl₂ 2.0g/L，CaCO₃ 6.0g/L，溶剂为水，初始pH 7.0。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法为：无菌转移低温甘油管CCTCC NO：M 209022菌株于新鲜、无菌固体平板上，28℃活化2～3天，挑取菌落接种至种子培养基，在温度28℃，通风搅拌或震荡下培养24～96小时，得到种子液；将种子液与发酵培养基以体积比1～10％的接种量接种至发酵培养基，在温度28℃，通风搅拌或震荡下进行发酵培养96～192小时，在培养至0～12小时期间，加入6.3～12g/L有效霉素A的水溶液，所述的有效霉素A的水溶液的加入量是使每升发酵培养基中加入有效霉素A的量为0.04～0.4g；发酵结束后，得发酵液提取分离，得所述阿卡波糖。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：

(1)无菌转移低温甘油管CCTCC NO：M 209022菌株于新鲜、无菌固体平板上，28℃活化2～3天，挑取菌落接种至种子培养基，在温度28℃，通风搅拌或震荡下培养24～96小时，得到种子液，所述种子培养基组成如下：玉米淀粉15.0g/L，黄豆饼粉40.0g/L，甘油20.0g/L，K₂HPO₄ 0.1g/L，CaCO₃ 2.0g/L，溶剂为水，初始pH7.0；

(2)将种子液与发酵培养基以体积比1～10％的接种量接种至发酵培养基，在温度28℃，通风搅拌或震荡下进行发酵培养96～192小时，在培养至0～12小时期间，一次性加入6.3～12g/L有效霉素A水溶液，所述的有效霉素A的水溶液的加入量是使每升发酵培养基中加入有效霉素A的量为0.04～0.15g；所述发酵培养基组成如下：麦芽糖80.0g/L，葡萄糖20.0g/L，黄豆饼粉10.0，g/L，玉米浆5.0g/L，FeCl₃ 0.1g/L，CaCl₂ 2.0g/L，CaCO₃ 6.0g/L，溶剂为水，初始pH 7.0；

(3)发酵结束后，得发酵液提取分离，得所述阿卡波糖。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中发酵液按如下方法分离：发酵液调节pH值至3，然后进行离心或过滤，得到澄清的阿卡波糖滤液；采用强酸型阳离子交换树脂吸附、洗脱；收集液经脱盐、高分辨率阳离子交换树脂精制，中和，冷冻干燥，制得阿卡波糖。