[发明专利]一种硫酸半乳聚糖及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸半乳聚糖及其制备方法和应用，具体说，是涉及一种从蜈蚣藻的多糖提取物中分离出的一种均一的硫酸半乳聚糖及其制备方法和应用，属于天然药物技术领域。

背景技术

海藻中的硫酸化多糖因具有抗氧化、抗病毒、抗凝血和抗肿瘤等多种生物活性，近几年来受到国内外的广泛关注。蜈蚣藻为一种红藻海膜科蜈蚣藻属藻类，蜈蚣藻自古以来就作为一种海洋中药，具有清热解毒和驱虫之功效，并且资源丰富，在我国的青岛、大连等地沿海有着广泛的分布，并被当地人所食用。多糖为蜈蚣藻的主要成分之一，近几年的研究结果表明：其具有较好的抗凝血、抗病毒等生物活性，显示出了其具有开发成药物的潜在价值。虽然中国专利文献ZL 200510023551.0公开了一种长叶蜈蚣藻多糖提取物、其制备方法及其在制备抗血管生成和/或抗肿瘤药物中的用途；及专利号为ZL200610026830.7的专利公开了一种蜈蚣藻多糖提取物在制备抗凝血、抗血栓、抗艾滋病和/或抗肿瘤药物中的用途。但上述专利文献中公开的蜈蚣藻多糖提取物，是一种由多种成分组成的粗多糖，要将蜈蚣藻来源的多糖提取物应用到临床，制造出一种有效、安全、作用机制明确的药物，还需要对其多糖提取物中的有效成分进行分离、结构确认及其药效的进一步深入临床研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种从蜈蚣藻的多糖提取物中分离出的一种均一的硫酸半乳聚糖及其制备方法和应用，为蜈蚣藻多糖提取物能得到广泛应用奠定基础。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供的硫酸半乳聚糖，其特征在于：

分子量为8.5×10⁴；硫酸基团的质量百分含量为25～27％；

化学结构是由重复单元A、重复单元B、重复单元C和重复单元D无规组成，其中：重复单元A的摩尔百分含量为10～13％，重复单元B的摩尔百分含量为6～7％，重复单元C的摩尔百分含量为63～65％，重复单元D的摩尔百分含量为17～19％；

重复单元A的化学结构式如下：

重复单元B的化学结构式如下：

重复单元C的化学结构式如下：

重复单元D的化学结构式如下：

上述四种重复单元的摩尔百分含量的总和为98～100％。

本发明所述的硫酸半乳聚糖中还含有摩尔百分含量为0～2％的含丙酮酸基的1，3连接的D-半乳糖。

本发明提供的硫酸半乳聚糖的制备方法，包括如下具体操作步骤：

a)水提取：将新鲜采集的蜈蚣藻用自来水冲洗掉表面盐分后切碎，加入蒸馏水，用冰醋酸调至pH＝5～7，在85～95℃提取0.5～1.5小时；残渣按上述过程再提取1次；合并2次的提取液；

b)醇沉：在搅拌下加入上述提取液2～4倍体积的乙醇，静置，离心收集沉淀；

c)冻干：将所得沉淀溶于水，透析24～72小时，然后冷冻干燥；

d)分离纯化：将上述冻干的多糖用pH＝7.2、浓度为20mmol/L的磷酸盐缓冲溶液溶解后，用DEAE-Sepharose Fast Flow凝胶色谱柱层析，先以浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液及pH＝7.2、浓度为20mmol/L的磷酸盐缓冲溶液洗脱2倍柱体积，再用浓度为0.8mol/L的氯化钠溶液及pH＝7.2、浓度为20mmol/L的磷酸盐缓冲溶液洗脱，苯酚-硫酸法检测收集，流水透析24～72小时，冷冻干燥；再用蒸馏水溶解，用Sepharose CL-6B柱纯化，以蒸馏水洗脱，硫酸苯酚法检测收集，冷冻干燥，即得本发明所述的硫酸半乳聚糖。

步骤a)中的水提取条件优先推荐为：用冰醋酸调至pH＝6，在90℃提取1小时。

步骤b)中的醇沉条件优先推荐为：在搅拌下加入上述提取液3倍体积的体积百分含量为95％的乙醇。

步骤c)中的透析时间优先推荐为48小时。

步骤d)中的流水透析时间优先推荐为48小时。

本发明还提供了所述的硫酸半乳聚糖在制备抗血管生成和/或抗肿瘤药物中的应用，特别是在制备抗S-180肉瘤和肝癌的药物中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明首次从蜈蚣藻的多糖提取物中分离纯化得到了一种均一的硫酸半乳聚糖，并对其进行了药效研究，为蜈蚣藻多糖提取物能制备出一种有效、安全、作用机制明确的药物提供了宝贵的途径，使蜈蚣藻多糖提取物能得到广泛应用成为可能。

附图说明

图1是实施例1制得的GFP08样品的高效凝胶排阻色谱图(HPGPC图)。