[发明专利]恒河猴爆发性肝功能衰竭模型的建立

说明书

技术领域

本发明涉及一种恒河猴爆发性肝功能衰竭模型的制备方法。

背景技术

急性肝衰竭(fulminant hepatic failure，FHF)临床常见，多由病毒感染、广泛肝组织切除、急性药物或毒物损伤等引起，其基本病理改变为肝实质细胞大片状变性坏死。病人预后凶险，死亡率非常高。除肝移植外，尚无更好的办法对其进行治疗。受限于供器官的严重短缺，细胞移植(成熟肝细胞或干细胞移植)、生物人工肝、组织工程肝等成为当前研究热点，但其有效性多是在小动物(基本上都是大鼠)上获得。促进肝细胞再生也是当前研究热点，但远未取得让人满意的进展，尚未找到能短期内显著促进肝细胞再生的理想药物。大动物，尤其是灵长类动物的实验数据极为缺乏，制约了这些新的治疗方案向临床过度。建立最接近于人类的灵长类动物AHF模型(急性肝功能衰竭(acute hepatic failure，AHF))，用以评估这些新的治疗方法的有效性和安全性，是将其最终应用于临床治疗的必经途径。

目前爆发性肝功能衰竭治疗研究最常用模型动物是啮齿类。由于啮齿类在进化关系上与人类相距甚远，以其为研究对象所获得的实验数据对临床指导意义不大。所用到的大动物模型仅限于猪和犬，同样与人存在巨大差异。恒河猴的解剖特点、各系统生理功能及对疾病和治疗药物的反应性与人类极为相近，是进行免疫学相关治疗和干细胞移植、异种移植临床前有效性和安全性评价的敏感动物。利用恒河猴FHF模型评价新型FHF治疗药物，研究肝脏干细胞或肝细胞移植以及辅助性肝支持措施，如组织工程肝和生物人工肝的治疗效果，是国际公认的临床前实验体系，对未来这些治疗方案的临床应用具有重要的指导意义。因此建立非人灵长类FHF模型成为FHF治疗研究和临床前药物评价的迫切需要。

建立大动物AHF的有以下基本原则：(1)可逆性(Reversibility)：给予有效治疗措施可使动物存活；(2)重现性(Reproducibility)：不给予治疗，所有动物都将死亡；(3)肝衰竭的致死性(Death from liver failure)：肝损伤最终将导致动物死亡；(4)治疗窗(Therapeutic window)：在动物死亡前有足够时间给予治疗并能评估其疗效；(5)大动物模型(Large animal model)：能连续取样检测、更接近人类特点；(6)对实验者无害(Minimal hazard to personnel)：药品须尽可能对实验人员无害；(7)接近人的代谢和生理学(Appropriate metabolism/physiology)：以便将实验结果推广至人类；(8)动物需有意识(Conscious animal model)：用于观察肝性脑病；(9)符合伦理(Compliance with ethical standards)：必须保证实验动物的福利和伦理规范。

目前肝毒性药物是建立FHF模型最常用手段。这些药物包括醋氨酚(Acetaminophen)、半乳糖酐(D-Galactosamine)、硫代乙酰胺(Thioacetamide，TAA)等。这些药物诱导的FHF模型均存在各种缺陷，如醋氨酚，其重现性差，相同剂量下动物存活时间差异巨大；伴发高铁血红蛋白血症、难治性贫血及其他器官损伤。半乳糖酐(D-Galactosamine)重现性差(死亡率和至死亡的时间差异非常大)；费用高(1-2g/kg)，不适合在大动物中应用。硫代乙酰胺(Thioacetamide，TAA)易导致严重低血压、低血糖、低体温以及肾衰竭，能直接导致神经损伤，与肝性脑病无法区分；对实验人员有较大毒性。病毒也可诱导FHF发生，但其复制困难，生物安全性差。

手术切除全部或大部分肝脏，或完全去血流化，也可建立HFH模型，但由于手术耗时、创伤大，血流动力学干扰大；除非原位肝移植，否则动物无法存活；肝脏本身并未受到损伤。这类模型适合研究肝移植及肝支持系统。

鹅膏蕈碱是有毒蘑菇的主要毒性物质，为环肽类生物碱，通过抑制RNA聚合酶造成细胞损伤，其靶器官主要为肝脏和胃肠道。内毒素脂多糖为革兰氏阴性细菌细胞壁主要成分，本身可引起肝细胞损伤。同时，通过激活肝脏内单核巨噬细胞，分泌大量炎性介质，引起肝细胞凋亡。通过门静脉系统直接给药，可最大限度降低药物对其他组织器官的损伤。目前尚未见以大型灵长类动物建立FHF动物模型的报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种鹅膏蕈碱联合内毒素脂多糖在制备用于筛选治疗爆发性肝功能衰竭药物和方法的动物模型中的用途。本发明的另一技术方案是提供了恒河猴爆发性肝功能衰竭模型的建立。