[发明专利]一种轮环藤宁的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于中药有效成分提取技术领域，涉及一种轮环藤宁的制备方法，具体的说，是一种从头花千金藤中提取纯化轮环藤宁的方法。

背景技术：

头花千金藤为防己科植物头花千金藤(金钱吊乌龟)(Stephania cepharantha Hayata)的根，又名白药子，是较常用的中药，已被《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材(第一册)所收载，具有散瘀消肿、止痛、清热解毒的功效。专利号200810115666.6公开了一种白药子提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，采用有机溶剂回流提取，该方法所得白药子提取物通过实验结果表明其在浓度50μg/ml时对人肝癌细胞HepG-2抑制活性较低，对肝癌细胞BEL-7402有较好的抑制活性，对结肠癌细胞HCT-8抑制活性最高，对肺癌细胞A-549也有一定程度的抑制作用，因此白药子提取物可用于制备抗癌药物，但抗癌活性成分不明。

李兴等建立RP-HPLC法测定地不容药材中千金藤素及轮环藤宁碱的含量，平均值分别为3.57(mg/g)和2.42(mg/g)。

轮环藤宁又称轮环藤宁碱，分子式：C₃₈H₄₂N₂O₆，分子量：622.75。为无色柱状结晶，熔点268.5～269.5℃。旋光度-6.2°(c＝1.45，氯仿)。轮环藤碱衍生物为肌松剂，并具有降血压等作用。对HeLa人体癌(HE)细胞有细胞毒活性。对治疗大鼠实验性矽肺有一定的效果。含有轮环藤碱的皮脂分泌促进剂能促进皮脂分泌，使皮肤保持自然持久的油性，同时对皮肤、毛发具有润泽保湿作用。能治疗干性湿疹，如特异反应性皮炎。

在国家知识产权局相关检索和中国期刊网的检索中，未发现提取、分离纯化头花千金藤中的轮环藤宁的工艺研究。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种轮环藤宁的制备方法。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种轮环藤宁的制备方法，其特征在于工艺步骤为：取头花千金藤块根，加入其8-18倍质量的30-95％乙醇水溶液室温浸泡24-48小时，纱布过滤，浓缩，加酸调节pH3-6，过滤，滤液再加碱调pH11-14，加入等体积的氯仿进行萃取，萃取2-5次，合并氯仿层，回收溶剂，加入氧化铝拌样烘干过层析柱，再依次以氯仿-甲醇(49∶1-1∶1)混合溶液梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，得到轮环藤宁粗晶，再用甲醇或丙酮水溶液重结晶，得到纯度大于98％的轮环藤宁。

所述的酸可选盐酸、硫酸、醋酸、磷酸水溶液中的一种。

所述的碱可选氨水、氢氧化钠水溶液、碳酸钠水溶液。

所述的氧化铝层析柱是中性氧化铝短粗柱。

所述的氧化铝柱层析的洗脱液为氯仿-甲醇混合溶液，洗脱梯度为4个流分后洗脱液增加20ml甲醇，每500ml为1流分。

所述的重结晶溶剂为甲醇或丙酮水溶液。

本发明具有如下的优点和有益效果：1)本发明可得到高浓度的轮环藤宁，可为白药子等含有轮环藤宁药材的质量评价提供基础，对该药材资源的开发及其制剂的质量控制具有重要的意义；2)本发明方法简单、设备投入小，可适用于规模化生产。

具体实施方式：

下面是本发明的实施例，但本发明不仅限于所述实施例。

实施例1：

取新鲜头花千金藤块根5kg，加入其重量10倍质量的45％乙醇水溶液室温浸泡36小时，200目纱布过滤，取滤液，浓缩，盐酸调节pH至4，过滤，滤液再加15％氨水溶液调pH至11，加入等体积的氯仿进行萃取，萃取3次，合并氯仿层，回收溶剂至总体积的500mL，滤出结晶物，将结晶物用少量氯仿溶解，加入500g中性氧化铝拌匀，烘干，再上短粗柱(径高比1∶3)，用氯仿-甲醇(49∶1-1∶1)混合溶液梯度洗脱，洗脱梯度为4个流分后洗脱液增加20ml甲醇，每500ml为1流分，收集含有轮环藤宁的流分，减压浓缩干燥，得到轮环藤宁粗晶，将粗晶用无水甲醇重结晶3次，干燥即得纯度为98.4％的轮环藤宁。

实施例2：