[发明专利]一种超临界流体萃取大叶茜草素的方法

说明书

技术领域：

本发明属于中药有效成分提取技术领域，涉及一种超临界流体萃取大叶茜草素的方法，具体涉及一种采用超临界CO₂萃取和硅胶柱层析技术从茜草中提取纯化大叶茜草素的方法。

背景技术：

大叶茜草素，为萘醌类。分子式：C₁₇H₁₅O₄，分子量：283.30，mp.128-132℃。为黄色片状结晶，熔点128～132℃，具有升华性，不溶于水，溶于乙醚、乙醇，易溶于氯仿、乙酸乙酯。

茜草Rubia cordifolia L.始载于《神农本草经》，具有凉血、祛瘀、止血、通经的功效，用于吐血、衄血、崩漏、外伤出血、淤阻经闭、关节痹痛、跌扑肿痛。茜草主产于陕西、河南等地。根中含有蒽醌衍生物、萘醌衍生物、萘氢醌衍生物、三萜化合物等。茜草有显著的止血、抑菌、消炎作用，大叶茜草素是其主要有效成分之一，体外实验表明，茜草素对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和克雷伯氏菌等均有显著的抑制作用。

索菲娅等研究不同采收期茜草中大叶茜草素含量的动态，发现夏季最高，即6-8月份，平均含量高于1.2％。

目前国内对大叶茜草素提取纯化工艺研究方面文献较少，谭朝阳、刘倩、彭亮等均采用乙醇回流提取，该方法仅得到茜草粗提物，无法得到高含量的大叶茜草素。

发明内容：

本发明目的是针对茜草中有效成分的提取纯化问题，提供一种超临界流体萃取大叶茜草素的方法。

本发明是采用如下技术方案实现的：

将茜草粉末用乙醇溶液对其进行浸润，放入萃取釜中，以超临界的CO₂为萃取剂，乙醇为夹带剂进行萃取，然后再解压进行分离，出料，再采用柱层析对萃取物进行纯化分离、洗脱剂进行洗脱；其中萃取压力25-45MPa、温度为30-60℃、萃取时间为1-5小时、解析压力为4-8MPa；层析柱填料为硅胶，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂、乙醇或甲醇。

本发明浸润所用乙醇溶液为体积百分比70-95％的乙醇溶液，料液比为1∶3-8，浸润1-3小时。

本发明超临界流体萃取步骤中，CO₂流量为0.25-0.5L/min。

本发明超临界流体萃取步骤中，夹带剂乙醇的流速为1-10ml/min，用量为茜草体积的20-35％。

本发明超临界流体萃取步骤中，石油醚-乙酸乙酯体积比为50∶1-20∶1。

本发明硅胶柱层析步骤中，洗脱方法为先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱杂质，再改以乙醇或甲醇洗脱，收集乙醇或甲醇洗脱部分。

本发明的有益效果：采用超临界CO₂提取大叶茜草素的重现性良好，萃取温度低、无溶剂残留，大叶茜草素的含量高；本方法工艺简单、操作时间短。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步阐述。

实施例1：

取1kg茜草粉碎至50目后用90％乙醇4L密闭浸润1小时，放入5L规格的超临界萃取釜中，以CO₂为萃取溶剂，萃取压力为26MPa、温度为37℃、萃取时间为3h，CO₂流量为0.3L/min，在整个萃取过程中，夹带剂乙醇以2ml/min的流速通入200ml；分离釜在压力4MPa条件下解析分离，得到萃取物81g。将萃取物溶于石油醚中，上硅胶层析柱，先以石油醚-乙酸乙酯50∶1洗脱，再以90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，减压回收乙醇，浓缩成浸膏、低温干燥即获得6.05g大叶茜草素，含量为92％。

实施例2：

取1kg茜草粉碎至20目后用70％乙醇6L密闭浸润2小时，放入5L规格的超临界萃取釜中，以CO₂为萃取溶剂，萃取压力为28MPa、温度为36℃、萃取时间为2h，CO₂流量为0.4L/min，在整个萃取过程中，夹带剂乙醇以3ml/min的流速通入280ml；分离釜在压力7MPa条件下解析分离，得到萃取物78g。将萃取物溶在石油醚中，上硅胶层析柱，先以石油醚-乙酸乙酯34∶1洗脱，再以95％甲醇洗脱，收集甲醇洗脱部分，减压回收甲醇，浓缩成浸膏、低温干燥即获得6.43g大叶茜草素，含量为92％。

实施例3：