[发明专利]半滑舌鳎性别特异微卫星标记及其在超雌鱼鉴定中的应用

说明书

技术领域

本发明属于水产生物技术中的鱼类性别鉴定和性别控制技术领域，具体涉及一种半滑舌鳎的性别特异微卫星标记及其在超雌鱼鉴定中的应用。

背景技术

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是一种近海温水性大型底层鱼类，其肉质细嫩、营养丰富，深受消费者喜爱，是我国海水鱼类主导养殖品种之一。但半滑舌鳎雌、雄个体生长速度差异很大，雌性比雄性生长快2-4倍。由于雄性个体生长缓慢、个体小，降低了半滑舌鳎的养殖产量，增加了养殖成本，因而严重影响了半滑舌鳎苗种的推广及养殖产业的形成。而开展半滑舌鳎遗传性别检测和性别控制技术研究，特别是开展半滑舌鳎全雌苗种研制和生产已成为半滑舌鳎养殖业健康、持续、快速发展的关键。

半滑舌鳎具有雌性特异的性染色体(W染色体)，而雄性性染色体同型(ZZ)(周丽青等，2005)。半滑舌鳎雌鱼产生Z型和W型两种卵子，通过人工雌核发育可以生产ZZ型雄鱼和WW型超雌个体两种雌核发育鱼苗，将WW超雌鱼苗培育成熟，然后与ZZ雄鱼交配，即可大量生产ZW型全雌鱼苗。不过，由于重组交换的存在，在雌核发育鱼苗中也还存在一些ZW型雌性个体。而要筛选培育WW超雌个体，其前提是必须能鉴定出WW超雌个体和普通ZW雌性个体，因而半滑舌鳎WW超雌个体的鉴定成为研制半滑舌鳎全雌鱼苗的关键。

性别特异分子标记是鉴定性别的很有潜力的技术手段。但目前有关鱼类性别特异分子标记和快速鉴定方法的研究只在少数几种鱼类上进行过，如加拿大西温哥华实验室的Devlin(1994)筛选到大鳞大马哈鱼Y染色体特异的DNA片段；Griffiths等(2000)在三椎棘鱼(Gasterosteus aculea tus L.)中找到了两个雄性特异的AFLP标记。但是，当应用于另外两种棘鱼时，却不能正确鉴定其性别。Rachael等(2003)比较了4种鲑鱼(北极鲑鱼、大西洋鲑、棕鳟和虹鳟)的Y染色体连锁图谱，分别在北极鲑鱼和虹鳟中找到了2个和6个性别连锁的AFLP标记。但这些标记具有种的特异性，因此应用范围较窄。

由于鱼类性别分化较为原始，雌雄性染色体差异小，因而其遗传性别的鉴定较为困难。虽然采用鱼类的性别特异分子标记可以鉴定出少数鱼类的雌雄性别，但要采用这种标记鉴定ZW雌性个体和WW超雌个体则非常困难。例如，Chen等(2007)分离到半滑舌鳎雌性特异AFLP标记，将其转化成SCAR标记后，建立了鉴定半滑舌鳎遗传性别的PCR方法。但因为AFLP标记是一种显性遗传的分子标记，难以区分纯合子与杂合子；因此，Chen等(2007)建立的半滑舌鳎AFLP雌性特异标记和遗传性别鉴定技术可以区分半滑舌鳎ZZ雄性个体和ZW雌性个体，但却不能区分ZW雌性个体和WW超雌个体。迄今，国内外尚未见有关半滑舌鳎WW超雌个体鉴定的分子生物学方法的文献报道。因此，探索能够鉴定出半滑舌鳎ZW正常雌性个体和WW超雌个体的分子生物学方法，对于筛选和大量培育半滑舌鳎WW超雌个体，进而培育半滑舌鳎全雌苗种，具有重要意义和应用价值。而微卫星标记具有共显性、多态性高、符合孟德尔遗传分离规律，与性别连锁等特点，如果筛选出雌性或雄性特异的微卫星标记，根据特异标记的序列设计引物，就有可能建立区分ZW雌性个体和WW超雌个体的分子生物学方法，从而解决半滑舌鳎ZW雌性和WW超雌个体鉴定的难题。而有关半滑舌鳎雌性特异微卫星标记及WW超雌鱼鉴定的分子标记方法，迄今在国内外均未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种半滑舌鳎的性别微卫星标记及其在超雌鱼鉴定中的应用，即通过筛选性别特异微卫星标记来获得半滑舌鳎WW超雌个体和ZW雌性个体鉴定的分子标记，采用此标记可以解决半滑舌鳎性别控制和全雌育种研究中不能快速鉴别ZW雌鱼和WW超雌鱼的问题，以弥补现有技术的不足。

本发明通过在半滑舌鳎基因组测序中获得的雌性特异微卫星标记，根据该微卫星标记在ZZ雄鱼、ZW雌鱼和WW超雌鱼中的基因型的差异，建立了采用性别特异微卫星标记鉴定半滑舌鳎ZZ雄鱼、ZW雌鱼和WW超雌鱼的技术方法。为半滑舌鳎性别控制和全雌苗种的生产提供了可靠的技术手段。

本发明的技术方案如下：

一种半滑舌鳎的性别特异微卫星标记，其特征在于微卫星标记的核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。其中SEQ ID NO：1是218bp雌性W染色体特异微卫星标记的序列：