[发明专利]一种蓝藻的检测分析方法

权利要求书

1. 一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：包括以下检测分析步骤：

（1）、鞘流形成：被测对象由两种液体形成，一种是待测样本液，首先用吸样器采集水样，滤除水样中粒径大于1mm的泥沙颗粒；然后在吸样器内部经过筛选排除空气和砂粒，余下的浮游植物作为待测样本液；另一种是鞘液；由吸样与液路控制单元将两种液体送至流动室中，待测样本液在鞘液的包裹下流过流动室检测区，在流体聚焦的作用下将样本液压缩至2个蓝藻细胞的宽度，使蓝藻细胞逐个通过流动室检测区； 

（2）、光照射部分： 

光源经过第一聚焦透镜或透镜组，形成一个椭圆形光斑，椭圆形光斑照射到流动室检测区中流过的待测样本液上；鞘液在流动室整流区中形成层流，在流动室加速区中将样本液逐渐聚焦，直至在流动室检测区中将待测样本液压缩成直径为小于2个蓝藻细胞尺度的样本流，这样待测样本液中的蓝藻细胞就只能一个一个的通过检测区照射光的照射，在每次检测事件中只能检测一个细胞；

（3）、光接收探测部分：蓝藻细胞逐个地受到检测区照射光的照射而产生光学信号，所述光学信号通过第二聚焦透镜收集，再通过长通滤色片进入光电探测器；光学信号被光电探测器接收，经过光电转换后形成电脉冲信号，送至信号处理与数据分析单元，一个细胞流过检测区时就形成一个电脉冲信号，这样就实现了样本中单个细胞的逐个测量；

（4）信号处理与数据分析部分：信号处理与数据分析单元对光电探测器的电信号进行滤波处理，并对样本的统计数据进行分析，根据分析方法在至少一维的蓝藻统计数据中划分至少2个区域，分别表示蓝藻的不同生理期， 对区域中的蓝藻细胞分别计数和分析，得到样本液的蓝藻总浓度、不同生理期的蓝藻浓度、不同生理期蓝藻所占百分比；所述蓝藻总浓度为一次测量过程中所有脉冲的总数目除以被测体积。

2.如权利要求1所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述流动室包含一个液体流过的导孔，该导孔分为三个区域：整流区、加速区、检测区；所述检测区是光照射区域为一个边长为200um～400um的方孔或者矩形孔，由光学透明材料制成；所述方孔或矩形孔的入口渐扩的部分形成加速区，鞘液通道与样本液通道相嵌套的部分为整流区。

3.如权利要求2所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述样本液通道出口为直径0.3mm的圆孔。

4.如权利要求1所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述光源采用发光二极管；所述光电探测器采用光电二极管。

5.如权利要求4所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述发光二极管的波长620±5nm，透光波长为640nm～850nm。

6.如权利要求1所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述流动室内部流动的液流要满足层流条件，即雷诺数<2300；鞘流对样本流进行流体聚焦，将样本流压缩至小于2个蓝藻细胞直径的宽度。

7.如权利要求1所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述椭圆形光斑短轴的长度为20±5um、长轴的长度为200±20um；椭圆形光斑短轴的方向与细胞流动方向一致，椭圆形光斑长轴方向垂直于细胞流动方向和光束传播方向。

8.如权利要求1所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述椭圆形光斑在流动室中心处的大小要求为：在样本流动方向上小于2个蓝藻直径，在同时垂直于光束传播和样本流动的方向上不小于流动室内孔宽度；在垂直于光束传播的方向上用一个大数值孔径的第二聚焦透镜将光信号收集到光电探测器上。

9.如权利要求1所述的一种蓝藻的检测分析方法，其特征是：所述蓝藻细胞受到照射后产生的光学信号包括：前向散射光、侧向散射光和荧光，所述前向散射光指的是沿着光路传播方向1~5度范围内的散射光，反映了细胞的体积大小；侧向散射光指的是垂直于光传播方向的散射光，角度范围为75度~115度，反映了细胞的内部复杂程度；荧光的角度范围和侧向散射光角度一致，其荧光的波长范围为640nm~850nm。