[发明专利]一种绿色木霉碱性蛋白酶及其真核表达方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于抗黄曲霉生长技术领域，具体涉及一种绿色木霉碱性蛋白酶及其真核表达方法与应用。

背景技术

绿色木霉菌(Trichoderma viride)属半知菌亚门，丛孢梗目，丛孢梗科，是当前公认的具有应用前景的生防菌，能够防治多种病害。绿色木霉菌以其资源丰富、持效期长、作用方式独特、对非靶标生物安全及不污染环境等优点而倍受重视。在国内外研究中，利用木霉菌防治作物的猝倒病、立枯病、灰霉病、纹枯病等均取得了良好的效果。

碱性蛋白酶(Alkaline Protease)，属于丝氨酸孢外高碱性蛋白酶，它能水解蛋白质分子，具有较强的分解蛋白质的能力，是重要的细胞壁裂解酶，在绿色木霉与其它病原菌的相互作用中起到主要作用。

目前，对碱性蛋白酶的研究较少，Geremia等(1993)从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)IMI206040菌株中分离到1种丝氨酸蛋白酶基因prb1，并证明它与菌寄生过程有关。Jesús(2002)等从哈茨木霉中分离出1种天冬氨酰蛋白酶基因papA，并在酵母中高效表达。但到目前为止，对绿色木霉菌中碱性蛋白酶的研究则未见报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种绿色木霉碱性蛋白酶。

本发明的另一目的在于提供所述绿色木霉碱性蛋白酶的真核表达方法。

本发明的再一目的在于提供上述绿色木霉碱性蛋白酶的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种绿色木霉碱性蛋白酶，其氨基酸序列如下所示：

MAIIRRLALYLGALLPAVLAAPAALHKKPFAVPNKFIVTLKFGASIDTDSHLAWVNDLHRRSLTKRST

AGVEKTYNIHTWSAYAGEFDDETIEQIKSSPDVGCVCGARLHHVPVGHCDRQACFDYTIRCSLGSRHC

FPSHIWVHKLHLSSLSWRWNFCLRSSLRYQHLPSAIRRACQPWLACCRGAACTYSWSWYSCFRNNCWI

YIWRCQAGLPNLRVSLLWRALHHLYYPRRLWLGRERHCLAEPCKQICYMYVAWRTCFIYLDDRHQRSL

QPGCAYHCRRWGWRLSRKPPTSLQHFSCVRTARHHCCSTGHQLAHCFLHQLWCWCVRFCPWCICSVSW

IGSNTATNTISGTSMATPHVVGLALYLQSLEGLSTPTAVTNRIKALATTGRVTGSLRGSPNSIIFNGH

SA；

所述绿色木霉碱性蛋白酶，其核苷酸序列如下所示：

ATGGCCATCATCCGTCGTCTTGCTCTCTATCTCGGAGCCTTGCTCCCGGCTGTCCTCGCCGCTCCCGC

AGCTCTTCATAAGAAGCCGGAGGCTGTACCTAACAAGTTTATTGTCACTCTGAAAGAGGGCGCTTCCA

TTGATACAGACTCTCATCTCGCCTGGGTAAATGACCTCCACCGTCGATCTTTGACCAAGCGTAGCACT

GCTGGTGTTGAAAAGACTTATAACATTCATACTTGGAGTGCTTATGCGGGCGAGTTTGATGACGAGAC

AATTGAGCAGATCAAGTCTAGTCCCGATGTAGGTTGCGTCTGTGGAGCCAGACTACATCATGTACCTG

TCGGACATTGTGACAGACAAGCGTGCTTTGACTACACAATCCGGTGCTCCTTGGGGTCTCGGCACTGT

TTCCCATCGCACATCTGGGTCCACAAGCTACATTTAAGCTCACTCAGCTGGCGCTGGAACTTTTGCCT

ACGTAGTTCCCTCCGGTATCAACACCTCCCATCAGCAATTCGGCGGGCGTGCCAGCCTTGGCTAGCTT

GCTGCAGGGGGGCAGCATGTACTTACTCTTGGTCATGGTACTCATGTTTCCGGAACAATTGCTGGATC

TACATTTGGCGTTGCCAGGCAGGCCTACCTAATCTCCGTGTCAGTCTTCTCTGGAGAGCTCTCCACCA