[发明专利]一种用活性炭提取琼胶水解液中寡糖的方法

说明书

一、技术领域

本发明属天然产物提取制备技术领域，具体涉及一种琼胶水解液中提取寡糖的方法。

二、背景技术

琼胶寡糖就是指琼胶多糖经水解后聚合度为2～10的低聚糖，包括琼寡糖和新琼寡糖两个系列。琼胶寡糖具有多种生理活性。不仅具有保湿美白功效而且具有益生元效用，能够促进双歧杆菌、乳酸菌的生长。动物实验显示琼胶寡糖具有体内抗氧化作用。最新研究表明琼胶寡糖减少促炎细胞因子TNF-α产生。同时琼胶寡糖能够有效减少组织过氧化。因此利用琼胶寡糖开发新药具有广阔的市场前景。

从琼胶水解液中提取寡糖最大的困难是如何实现大批量提取以及除盐，因为琼胶水解液一般含有大量的盐类杂质，对寡糖的提取影响非常大，因此解决寡糖与盐类的有效分离，是提取寡糖的关键。

根据目前国内外文献及专利报道，琼胶寡糖的提取分离，多采用凝胶层析除盐，此方法操作流程长，分离容量小，不适宜进行规模化生产。

三、技术内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用活性炭提取琼胶水解液中寡糖的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种用活性炭提取琼胶水解液中寡糖的方法，包括如下步骤：

(1)琼胶水解：配制0.0001～0.1g/mL的琼胶水溶液，加入酶液或酸，30～50℃水浴保温2～8h，灭酶活或加碱中和，离心去沉淀得琼胶水解液；

(2)活性炭吸附：于琼胶水解液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml琼胶水解液加入5～20g活性炭，搅拌吸附30～120min后抽滤，得到吸附了寡糖的活性炭；

(3)寡糖的洗脱：将体积分数为1％～100％的醇溶液加入到吸附了寡糖的活性炭中搅拌洗脱30～120min，每10g吸附了寡糖的活性炭加入醇溶液10～200ml，抽滤，将滤液浓缩干燥后即得琼胶寡糖。

进一步，步骤(1)所述的酶优选为α-琼胶酶或β-琼胶酶。更进一步，所述的酶的添加量为每10ml琼胶水溶液加入0.1ml～3ml酶活单位为200U的酶液。

进一步，所述的酸优选盐酸、硫酸、柠檬酸、甲酸、醋酸、磷酸、硝酸中的一种。更进一步，所述酸的加入量为使得酸的终浓度为0.1mol/L～0.5mol/L。

进一步，步骤(3)所述的醇优选甲醇、乙醇、丁醇中的一种。

进一步，步骤(3)所述醇溶液的体积分数优选为1～50％。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明省略了传统工艺中用需要凝胶柱进行洗脱除盐的繁琐过程，以及解决了凝胶分离容量小的问题。本发明无需将活性炭进行装柱，大大提高寡糖的分离量及分离速度。另外采用活性炭，由于活性炭对色素的吸附力远远大于对寡糖的吸附力，而对盐类杂质吸附力远小于对寡糖的吸附力，所以寡糖可以被独立洗脱下来，因此可以起到很好的脱色和除盐的效果，并且脱色和除盐一步完成。本发明操作可以有效减少盐类杂质对提取工艺的影响，极大地简化了操作，降低了成本，可以大批量进行提取，并且生产过程对环境无污染，具有工艺稳定性及重现性好等优点，适宜规模化生产。

四、附图说明

图1是本发明制备寡糖的薄层色谱示意图；图中薄层板为硅胶G，其中展开剂为正丁醇∶乙酸∶水＝2∶1∶1，显色剂为百里酚-硫酸(5ml浓硫酸加入到含有0.5g百里酚的95ml乙醇中制的)，80℃下显色3min；图1中，A为点样原点，B为琼胶寡糖标准品，C为检测样品。

图2是按照本发明的方法制得样品的高效液相色谱图，其纯度为80.2％，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号响应值。

图3是琼胶寡糖标准品的质谱图。

图4是琼胶寡糖标准品的碳核磁共振谱图。

五、具体实施方式

下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此：

实施例1

1)琼胶水解：配制0.001g/mL的琼胶水溶液，每10ml琼胶水溶液加入200U琼胶水解酶酶液1ml(琼胶水解酶由浙江工业大学药学院实验室提供)，30℃水浴保温4h，沸水浴灭酶活，离心去沉淀得琼胶水解液。

2)活性炭吸附：于琼胶水解液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加入8g活性炭，搅拌吸附60min后用布氏漏斗抽滤，得到吸附了寡糖的活性炭。