[发明专利]积雪酸在制备预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用

说明书

本申请为申请号为200610024408.8的专利申请“积雪酸在制备预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用”的分案申请。

技术领域

本发明涉及积雪酸在制药中的应用，尤其涉及积雪酸在制备预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。

背景技术

积雪草是一种植物药，积雪苷是从积雪草中提取的物质，也称为积雪甙(Asiaticoside)，结构见式II。

式II

研究发现积雪苷在治疗皮肤粘膜损伤后，其具有纤维疤痕过增生作用。该物质作为相关用途的化妆品和药品均有上市，在这些产品中积雪苷是其主要活性成份。积雪酸是积雪苷脱糖后即形成的苷元，其结构见式I所示：

式I

发明内容

本发明的目的是提供积雪酸在制备预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。

其中，所述的肾脏可为肾间质和/或肾小球，优选肾间质。

探讨积雪酸(JXS)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用。方法：将大鼠随机分为UUO组和UUO+JXS组，另设假手术(SHAM)组。用药组(即UUO+JXS组)于术前三天灌胃给予积雪酸20mg/kg，对照组(即SHAM组)和UUO组给予等体积生理盐水，直至术后第21天处死动物，观察左侧肾脏病理学改变，比较肾间质基质含量和肾间质纤维化程度；以α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的免疫组化观察肾小管上皮细胞转型情况。

本发明的积极进步效果在于：本发明通过用积雪酸对大鼠肾脏纤维化的影响，证实了积雪酸具有抗肾脏纤维化的作用。因而，积雪酸可作为活性成份用于制备抗肾脏纤维化的药物。

具体实施方式

实施例1

1.材料与方法

1.1实验动物wistar大鼠(中国科学院上海实验动物中心)，雄性，健康清洁级，8周龄，体重180～220g，饲养环境为每笼5只，室温22±2℃，相对湿度55±2％。

1.2药物与试剂积雪酸由广西昌州天然产物开发有限公司或上海医药工业研究院制造，小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体购自SIGMA公司，兔抗小鼠IgG即用型二抗购自上海抗体公司，DBA显色试剂盒购自华美公司。

1.3方法

1.3.1动物模型制作手术时大鼠以10％水合氯醛0.03ml/kg IP麻醉后右卧位固定，剪毛消毒，左侧腹部切口，分离左侧输尿管，5-0号丝线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，在两道结扎点间剪断输尿管，逐层缝合制作UUO模型。假手术组仅开腹并游离左侧输尿管，但不结扎和剪断。

1.3.2动物分组及给药大鼠随机分为三组，分别为假手术(SHAM)组、UUO组和UUO+JXS组，在UUO术前三天开始给药JXS 36mg/kg直至UUO术后第21天。

1.3.3检查项目术后第21天血标本分离出血清检测生化常规，处死动物，抽取UUO大鼠左侧残余尿定量；留取左侧肾脏，肾组织分2部分，一部分作光镜病理检查，另一部分经皮、髓质分离后置于-70℃冻存作α-SMA免疫组化。SHAM大鼠留取左侧肾脏作同样处理。

1.3.4组织病理检查肾组织经4％多聚甲醛缓冲液固定，石蜡包埋后3μm切片，进行PAS和MASSON染色。光镜下观察PAS染色切片皮质肾间质炎细胞浸润程度和纤维化等病理学改变，双盲给予PAS染色下肾间质病变计分，标准为：0分(间质病变占间质总量＜5％)；1分(间质病变占间质总量5％-15％)；2分(间质病变占间质总量15％-30％)；3分(间质病变占间质总量30％-60％)；4分(间质病变占间质总量＞60％或有局灶性坏死)。每张切片在放大200倍情况下取10个不重叠的视野，分别对每个视野进行打分，取平均值作为该标本的间质病变计分。对MASSON染色肾组织切片进行半定量分析，具体步骤如下：采用北航医学图像分析管理系统，在同一条件下对每张标本选取15个不重复视野(40×)，将呈现为绿色的纤维区域(去除肾小球和大血管)视为阳性目标，以阳性面积与统计场总面积的比值作为肾小管间质的纤维化指数。采用北航医学图像采集和分析系统软件对MASSON染色进行分析。