[发明专利]一种杠柳次苷的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种杠柳次苷的制备方法，还涉及一种包含杠柳次苷的提取物及其组合物。

背景技术

中药香加皮(Cortex Periplocae)又名北五加皮，是萝藦科植物杠柳(Periploca sepium Punge)的干燥根皮，因其含有强心苷成分，近年来常用于治疗急、慢性充血性心力衰竭。目前对于香加皮强心苷类的研究，由于杠柳毒苷(Periplocin，C₃₆H₅₆O₁₃)在香加皮药材中含量较高，制备单体化合物相对容易，故关注杠柳毒苷较多，而对杠柳次苷关注较少。

杠柳毒苷结构为杠柳苷元-(D-加拿大麻糖)-(D-葡萄糖)。杠柳次苷(periplocymarin，C₃₀H₄₆O₈)结构为杠柳苷元-(D-加拿大麻糖)，是由杠柳毒苷脱去一分子葡萄糖而生成的次生甲型强心苷。通常甲型强心苷及其苷元的活性/毒性存在如下规律：苷元＜单糖苷＞二糖苷＞三糖苷[肖崇厚.中药化学.上海：上海科学技术出版社.1997：341]。杠柳次苷为单糖苷，其活性/毒性之所以大于杠柳苷元，是由于其对心肌细胞膜上类脂质的亲和力大于苷元；而杠柳毒苷(二糖苷)的活性/毒性之所以小于杠柳次苷，是由于随着这些分子中糖基数目的增加，水溶性增大，亲脂性降低，与心肌细胞膜上类脂质的亲和力减弱，强心作用减小。文献报道[李章文.杠柳皮(北五加皮)的强心作用.中华医学杂志.1956，7：651]杠柳次苷具有比杠柳毒苷强心作用更快、持续时间更短、蓄积作用更小等特点。另外，研究发现杠柳毒苷与大鼠、人体的肠菌温孵，会迅速代谢生成杠柳次苷[任晓亮，谢跃生，潘桂湘，等.香加皮强心成分杠柳毒苷肠菌代谢研究.天津中医药，2007，24(6)：515.]；大鼠口服杠柳毒苷，粪便中也主要以杠柳次苷的形式排泄[王强，任晓亮，王焱，等.杠柳毒苷在大鼠体内排泄的初步研究.天津中医药大学学报，2008，27(1)：29]。因此，杠柳次苷也应是香加皮起强心作用的主要成分之一。对杠柳次苷进行制备，有利于明确中药香加皮强心物质基础的研究，以及利于该中药的进一步开发。

默克索引(14版，第1239页)提到过杠柳次苷的酶解制备方法：用70％乙醇提取希腊杠柳，然后用源自Strophanthus courmonti Saclcux，Apocynaceae种子的毒毛旋花子双糖酶(enzyme strophanthobiase)处理，然而其中并未提及杠柳毒苷酶解的具体工艺以及工艺效果例如杠柳次苷的收率、纯度等。

因此提供一种稳定、可靠、低毒、和/或可用于工业化生产的制备杠柳次苷的方法，获得高纯度的杠柳次苷，以供新药研发或科学研究，仍是本领域技术人员急于解决的问题。

发明内容

本发明的目的是克服现有制备杠柳次苷技术中存在的不足，提供一种稳定、可靠、低毒、和/或可用于工业化生产的、制备高纯度杠柳次苷的方法。本发明令人意外地发现，通过将含有杠柳毒苷的底物用蜗牛酶进行酶解，接着进行柱层析和重结晶，可以以高的纯度和/或产率获得杠柳次苷。本发明基于以上发现而得以完成。

发明概述：

为此，本发明第一方面提供了一种制备杠柳次苷的方法，其包括以下步骤：

(1)使含有杠柳毒苷的底物与蜗牛酶混合，进行酶解反应，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物进行色谱层析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物从甲醇和水的混合物中重结晶，得到杠柳次苷。

本发明第二方面提供了一种包含杠柳次苷的提取物，其中以重量百分数计包含80％以上(或者优选85％以上，优选90％以上)的杠柳次苷。

本发明第三方面提供了一种组合物，包含杠柳次苷或者本发明第二方面任一项所述的提取物，并且其中基本上不合杠柳毒苷。

发明详述：

本发明第一方面提供了一种制备杠柳次苷的方法，其包括以下步骤：

(1)使含有杠柳毒苷的底物与蜗牛酶混合，进行酶解反应，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物进行色谱层析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物从甲醇和水的混合物中重结晶，得到杠柳次苷。

在本发明第一方面所述方法的一个实施方案中，其中所述底物可以是杠柳毒苷单体、含有杠柳毒苷的香加皮提取物、含有杠柳毒苷的香加皮药材、或其组合。