[发明专利]利用抵抗素表达水平检测猪脂肪沉积的方法

权利要求书

1.一种扩增猪抵抗素基因片段的引物对，其核苷酸序列如下所示

P1：CCCGTGGATGAAGCCATCAA；

P2：CAGGCGGAGCCACACGTG。

2.一种检测猪脂肪沉积的方法，其步骤包括：

(1)从被测的猪组织中抽提总RNA，反转录得到它的cDNA样品；

(2)用序列表SEQ ID NO：2和3所示的引物对对步骤(1)所述的cDNA样品进行PCR扩增，得到如序列表SEQ ID NO：1所示的基因片段；

(3)用序列表SEQ ID NO：5和6所示的引物对对看家基因G3PDH进行PCR扩增，得到如序列表SEQ ID NO：4所示的基因片段；

(4)对步骤(2)和步骤(3)得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中比较其光密度值；

其中步骤(2)所述的PCR扩增步骤如下：

1)扩增反应体系：在50ul PCR反应液中，含有2ul cDNA模板，5ul10×PCR缓冲液，4ul2.5mmol/L dNTPs，2ul引物P1(10μM)，2ul引物P2(10μM)，2ul Taq DNA聚合酶，33ul无菌去离子水；

2)PCR反应条件：94℃ 3min；94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 1min，30个循环；及终延伸72℃ 7min；

步骤1)的缓冲液配方如下：20mM Tri-HCl，pH 8.4，200mM KCl，100mM(NH₄)₂SO₄，20mM MgSO₄。

3.权利要求2所述的方法在检测猪脂肪沉积中的应用。

4.权利要求1所述的引物对在检测猪脂肪沉积中的应用。