[发明专利]金银花菌深层发酵生产工艺

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，涉及一种金银花菌(学名：茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden)的深层发酵生产工艺，属传统中药和现代生物技术有机结合的产物。

背景技术

金银花菌(茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr)Ryvarden)是山东著名道地药材金银花植株上的一种药用真菌，在当地民间具有悠久的药用历史，2002年载入《山东省中药材标准》。该菌子实体用于治疗咽炎、喉炎、扁桃体炎等口腔炎症，临床疗效显著。药理实验研究证明，该菌具有抗炎、抗病毒、抗癌、促进肌体免疫等生物活性，是一种珍贵的、可以代替金银花消炎作用的真菌药物资源。为深入开发利用这一资源，我们对其进行了菌种分离纯化，得到了该菌的纯菌种，并通过液体深层发酵的生物技术，达到大规模人工生产金银花菌的目的。

目前，我国金银花年产量仅800万公斤，而国内外市场需求量为2000万公斤以上，每年供需缺口达1200万公斤。本发明生产的金银花菌丝，在一定程度上可以代替金银花作为清热解毒药使用，以缓解金银花菌供需矛盾紧张的局面。此外本发明生产的金银花菌丝营养成分丰富，经检测氨基酸含量达40％以上，也可以作为一种氨基酸营养补充剂。

发明内容

本发明所用金银花菌的原菌种经鉴定，属于真菌界、担子菌门、无隔担子菌纲、非褶菌目、锈革孔菌科真菌。子实体形状不规则，呈扁平状、拳形、半圆形或云片状。菌盖表面粗糙，硬而韧，覆瓦状排列，赤酱色至浅栗色，无光泽，有同心环状棱纹及细微绒毛，1.5-4×3-7cm，边缘薄或稍钝，深肉桂色。无菌柄，子实体背面黄褐色，肉眼可见布满细小的管口，管口浅肝褐色至暗褐色，有时可见成簇的新生子实体。断面可见菌肉呈纤维质，棕黄色，菌管长1-2mm。孢子呈淡黄色，球形或阔卵形，直径3μm。

我们选用PDA培养基，对该菌进行了菌种分离纯化，得到了该菌的纯菌种，并通过液体培养实验，初步确定了菌丝体的发酵培养基配方为麦芽汁(10Bx)10％，蛋白胨0.3％，葡萄糖1％，蔗糖1％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0。采用以上培养基，27℃培养96小时摇瓶培养菌丝体收率达到最高，可以达到1.5％。确立了中试发酵生产工艺流程：试管斜面菌种——500ml三角瓶液体种子(装量200ml)——5L血清瓶种子(装量3L)——1吨发酵罐(装量500L)——菌丝过滤——气流沸腾干燥——成品。中试发酵培养基和大生产培养基为：麦芽汁(10Bx)15％，蔗糖1％，葡萄糖1％，蛋白胨0.3％，玉米浆0.5％，PH5.0-6.0，培养条件为：装量50％，接种量6-10％；温度27±1℃，搅拌转速160rpm，通气量6立方米/小时，36～72小时菌丝体得率就达到最高，可以达到1.6％。

为了对发酵菌丝进行质量评价，我们通过高效液相法测定了金银花菌发酵菌丝的脂溶性成分麦角甾醇含量做了测定并与原子实体中麦角甾醇含量做了对比，结果证明以Agilent 1100LC高效液相色谱仪，Zorbax eclipse XDB C8，(150mm×4.6mm)色谱柱，甲醇为流动相，检测波长为282nm，流速1.0ml/min。标准曲线在0.1～0.5mg/ml线性良好，最低限量为0.1mg/ml，RSD＝2.88％，金银花菌发酵菌丝中的麦角甾醇含量是原子实体麦角甾醇含量的10倍。

该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保存(北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所；邮编100080)；分类命名：茶藨子叶状层菌(新分类学名)环棱褐孔菌为曾用名Xanthochrous nilgheriensis(Phylloporia ribis(Schumach.：Fr)Ryvarden)

保藏编号CGMCCNo.1195，保藏日期2004年7月22日。

附图说明：

附图为金银花菌发酵生产主要工艺流程。

具体实施方式：

金银花菌的液体深层发酵工艺流程

1、在PDA培养基上的培养情况：将分离到的纯菌种调取少许，转移到PDA培养基上，30℃培养3天，菌落圆形，边缘整齐，平铺，中间部分隆起，白色，絮状，致密，背面黄色，具放射状沟纹，直径2.7-3.2cm。显微镜下观察菌丝无色，细长，具横隔，纵横交错，多分枝，直径2-2.5μm；菌丝细胞的细胞壁薄而透明，菌丝生长初期可见锁状联合，生长后期分枝较多时，锁状联合不明显。