[发明专利]一种真核表达载体以及在制备抑制白血病细胞增殖药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种真核表达载体，以及该真核表达载体在制备抑制白血病细胞增殖药物中的应用。

背景技术

白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor，LIF)作为的IL-6细胞因子家族的一员，能够抑制白血病细胞，例如人HL-60、U937、小鼠M1系的增殖。然而，白血病细胞增长快速并对LIF感应能力差的特性，使得机体内有限的LIF无法有效抑制白血病细胞的生长[T.Maekawa，D.Metcalf，Clonalsuppression of HL60 and U937 cells by recombinant human leukemia inhibitoryfactor in combination with GM-CSF or G-CSF，Leukemia 3(1989)270-276；D.P.Gearing，N.M.Gough，J.A.King，D.J.Hilton，N.A.Nicola，R.J.Simpson，E.C.Nice，A.Kelso，D.Metcalf，Molecular cloning and expression of cDNA encoding amurine myeloid leukaemia inhibitory factor(LIF)，EMBO J 6(1987)3995-4002；T.Maekawa，D.Metcalf，D.P.Gearing，Enhanced suppression of human myeloidleukemic cell lines by combinations of IL-6，LIF，GM-CSF and G-CSF，Int JCancer 45(1990)353-358.]。而外源性、非生理剂量的LIF对脂肪细胞、生殖细胞和内分泌细胞等正常细胞具有显著的细胞毒性，同时干扰了细胞因子间的正常协调作用，所以LIF的药用价值也不能得到有效地体现[D.Metcalf，N.A.Nicola，D.P.Gearing，Effects of injected leukemia inhibitory factor onhematopoietic and other tissues in mice，Blood 76(1990)50-56.]。

LIF是一种多功能、作用广泛的细胞因子。它的广泛生物学效应是通过结合靶细胞膜上的LIF受体(LIFR)来实现的。LIFR包括两个亚基，LIFRα(gp190)和LIFRβ(gp130)。其中，LIFRα含有1239个氨基酸，胞外区由789个氨基酸构成，跨膜区由26个疏水氨基酸组成，胞内去由238个氨基酸构成。LIFRα的胞内区共有三个功能域(Box1、Box2和Box3)，这一官能的主要作用结构为YXXQ(Y为酪氨酸，X为任意氨基酸，Q为谷氨酰胺)，是激活细胞内信号分子的必须序列，在LIF-LIFR的信号通路激活过程中，LIF首先与LIFRα结合，并使之与另一受体亚基β结合形成异源性二聚体，进而启动细胞内信号转导，引导胞外的信号转入核内，调控特定基因的表达，使细胞产生一系列的生理或病理变化[Y.Zhang，T.Willson，D.Metcalf，D.Cary，D.J.Hilton，R.Clark，N.A.Nicola，The box-1 region of the leukemia inhibitory factor receptoralpha-chain cytoplasmic domain is sufficient for hemopoietic cell proliferation anddifferentiation，J Biol Chem 273(1998)34370-34383.]。