[发明专利]日本血吸虫蛋白质及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种日本血吸虫蛋白质及其应用。

背景技术

血吸虫病是一种人和动物都会受传染的寄生虫病，血吸虫发育的不同阶段，尾蚴、童虫、成虫和虫卵均可对宿主引起不同的损害和复杂的免疫病理反应，流行范围广，对人和家畜均产生严重危害。目前，主要采用药物，例如吡喹酮，对已经感染血吸虫病的人或动物进行治疗，但是这不能解决再次感染的问题。要想更有效的防治血吸虫病，比较可行的措施是采用疫苗与药物治疗相结合的方式。因此，寻找新的疫苗候选抗原仍是当今血吸虫疫苗研究的重点之一。

UDP-葡萄糖-4-差向异构酶(UDP-glucose-4-epimerase，GALE)主要参与半乳糖代谢途径，可以催化UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖的可逆反应，其重要性在于真核生物可以利用UDP-葡萄糖来合成海藻糖、蔗糖、肝醣等多种糖类，为生物体的生长代谢提供能量供应。

SjGALE是日本血吸虫中编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的基因，目前尚没有关于该基因及其表达的蛋白质作为日本血吸虫疫苗的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫蛋白质，该蛋白质包含UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的部分氨基酸序列，具有免疫原性，可作为抗血吸虫的疫苗候选抗原。

此外，还需要提供一种日本血吸虫蛋白质在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种日本血吸虫蛋白质，所述蛋白质具有免疫原性，且包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种编码上述日本血吸虫蛋白质的核苷酸序列。优选的，所述核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，还提供了一种抗血吸虫疫苗，该疫苗包含上述日本血吸虫蛋白质。

在本发明的另一方面，还提供了一种能与上述日本血吸虫蛋白质特异性结合的抗体。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述核苷酸序列的重组载体。

在本发明的另一方面，还提供了一种宿主细胞，包含上述重组载体，或已用上述核苷酸序列转化或转染。

在本发明的另一方面，还提供了上述日本血吸虫蛋白质在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗中的应用。

在本发明的另一方面，还提供了上述日本血吸虫蛋白质在制备诊断血吸虫病的产品中的应用。

本发明具有免疫原性的日本血吸虫蛋白质可以作为诊断抗原对血吸虫病畜进行诊断。

在本发明的另一方面，还提供了上述日本血吸虫核苷酸序列在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗中的应用。

本发明日本血吸虫蛋白质，在小鼠免疫保护性实验中，使免疫组小鼠的减虫率与肝脏减卵率分别达到35.7％和53％(与佐剂对照组相比)，表明本发明具有免疫原性的日本血吸虫蛋白质对血吸虫病有良好的免疫预防效果，能有效降低宿主体内虫体数目，更重要的是肝脏内虫卵数目的减少可以大大降低宿主肝脏的病理反应。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明实施例1重组蛋白质表达与纯化SDS-PAGE电泳图；

图2是本发明实施例2重组蛋白质免疫原性Western blot检测结果图；

图3是本发明实施例4免疫动物血清特异性抗体水平检测结果图；

图4是本发明实施例5产生保护性的免疫反应类型分析图。

具体实施方式

下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京：科学出版社，2002)中所述的方法进行。

本发明对日本血吸虫UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(SjGALE)编码的蛋白质进行重组表达和纯化，并将重组蛋白质进行免疫保护性实验，验证其对宿主的免疫保护效果，为开发抗血吸虫新疫苗和药物提供候选抗原分子。

实施例1rSjGALE重组蛋白质的表达和纯化

将日本血吸虫UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(SjGALE)的编码序列(SEQ ID NO：2)插入原核表达载体pET28a(+)的多克隆酶切位点，构建成pET28a-SjGALE重组表达载体，该重组表达载体经测序鉴定正确后进行下面的表达和纯化步骤。

1.重组蛋白质的原核表达