[发明专利]壳聚糖微球作为基因疫苗载体的制备方法及应用

权利要求书

1.一种壳聚糖纳米微粒的制备方法，该微粒可作为在实验动物包括人身上增强核酸疫苗免疫应答的非病毒载体。其特征在于：

50mL 1.0×10^-4g/ml氯金酸(HAuCl₄)水溶液剧烈搅拌下加入不同浓度(0.01％-0.5％w/v)的壳聚糖乙酸溶液，冰浴条件下快速加入适量的硼氰化钠，继续搅拌30分钟。

2.权利要求1所述壳聚糖纳米微粒作为增强核酸疫苗免疫应答的非病毒载体的应用，其特征在于形成壳聚糖/疫苗微球。

3.权利要求2所述壳聚糖/疫苗微球的制备方法：

壳聚糖/疫苗微球的制备是壳聚糖和DNA共凝聚的过程。壳聚糖的阳离子特性是其必要条件。具体操作是在固定的体系里(1×TAE)，固定DNA疫苗的质量，改变壳聚糖的质量，分析不同N/P(0.1～1.0～10.0)下凝胶电泳的结果来筛选最好的(金-壳聚糖/DNA)比例。硫酸钠作为去溶剂化试剂(5mM-50mM)进入这个体系，稳定形成的壳聚糖/疫苗微球。

4.在权利要求2中的核酸疫苗，是编码病原体抗原基因的DNA和/或RNA。

5.权利要求4中的抗原，可以选自但不限于如下病原体：人免疫缺陷病毒、水痘带状疱疹病毒、1型单纯疱疹病毒、2型单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、登革病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或戊型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、人乳头瘤病毒、流感病毒、脑膜炎病毒、沙门氏菌属(Salmonella)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、疏螺旋体属(Borrelia)、衣原体属(Chlamydia)、博德特氏菌属(Bordetella)、链球菌属(Streptococcus)、支原体属(Mycoplasma)、分枝杆菌属(Mycobateria)、嗜血菌属(Haemophilus)、疟原虫属(Plasmodium)或弓形虫属(Toxoplasma)或者肿瘤相关抗原。

6.将权利要求2中的壳聚糖-疫苗微球用乙酸缓冲溶液悬浮，调节成1-100ng/ul的微球悬液，即可得应用剂型。

7.在权利要求6中的应用剂型可用于肌肉注射，腹腔注射，皮下注射，皮内注射。

8.在权利要求6中的应用剂型可用于粘膜给药和口服给药。

9.权利要求6中的微球悬液可用于哺乳动物包括人的预防性基因疫苗。

10.结合权利要求6中的微球悬液可用于哺乳动物包括人的治疗性基因疫苗。