[发明专利]一种治疗慢性乙型肝炎的制剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗慢性乙型肝炎的制剂，属于中药技术领域。

背景技术

中西医对乙型肝炎的认识是一致的。乙型肝炎的病原体是乙肝病毒，病毒清除和发病机制与机体对病毒抗原的免疫应答相关，慢性乙型肝炎表现为机体免疫功能低下，乙肝病毒携带者表现为机体免疫耐受。中医认为，乙肝病毒是一种具有湿热性质的疫毒之邪，是乙型肝炎的致病因素，然而毒邪是否致病，在一定程度上取决于人体正气的强弱。治疗上，一是扶正，“正气存内，邪不可干”，以健脾补肾为要；二是祛邪，“邪去才能正安”，以清热利湿解毒为祛邪之要。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种能有效治疗慢性乙型肝炎的制剂；

本发明的另一个目的是提供一种制备上述制剂的方法。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种治疗慢性乙型肝炎的制剂，其特征在于按重量份由以下原料药制成：

白花蛇舌草    200～400    蒲公英    100～300

虎杖          50～250     田基黄    80～300

黄芪          100～300    五味子    50～250

丹参    100～300    赤芍    100～300

甘草    30～150。

如上所述的一种治疗慢性乙型肝炎的制剂，其特征在于按重量份由以下原料药制成：

白花蛇舌草  300    蒲公英  200

虎杖        150    田基黄  200

黄芪        200    五味子  150

丹参        200    赤芍    200

甘草        100。

本发明制备如上所述的一种治疗慢性乙型肝炎的制剂的方法，其特征在于包括以下步骤：按比例称量上述各原料药；加水煎煮二次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，取上清液，加入尼泊金、苯甲酸钠适量，制成1000ml，即得。

为了解该药的体外抗乙型肝炎病毒的作用，本发明以HBV转染的人肝癌细胞(HepG₂)2215细胞株为靶细胞，拟通过体外细胞培养实验观察其对HBV分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用。

1材料与方法

1.1实验试剂与仪器

本发明制剂为水煎提取液，80℃间歇灭菌3天，每次30min，离心2000rpm，取上清，分装无菌管，-4℃冻存备用。2215细胞是HBVDNA传染人类肝癌细胞株HepG₂所建立的细胞株，来自广州空军医院病毒室。DMEM培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(美国Gibco公司)，MTT(美国Sigma公司，使用时用PBS配制成0.4mg/mL的浓度)，G418(美国Sigma公司)，胰蛋白酶(Serra公司)，CO₂培养箱(德国SHEL B公司)，细胞培养板(美国Corning公司)，酶联免疫检测仪(美国EXL-800型)。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养

采用DMEM培养液(含有10％胎牛血清，380ug/mLG418，0.03％L-谷氨酰胺，100IU/mL青霉素，100IU/mL链霉素)置37℃，5％CO₂孵育箱中培养。在长满2215细胞的培养瓶内加0.25％胰酶37℃消化3min，加培养液吹打，1∶3传代，10天长满。取生长良好状态的2215细胞，配制成5000个/mL的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板，每孔100ul，每个稀释度3个复孔，设细胞对照。5天后收集上清检测HBsAg、HBeAg，余下细胞检测细胞存活率。

1.2.2细胞存活率检测

参照建立的MTT法测定细胞存活率，吸去96孔板培养液，加入0.4mg/mL的MTT液100ul/孔，37℃孵育4h，吸弃上清液，加入100ul的DMSO溶解，用酶联免疫检测仪于490nm波长检测，并按公式计算：细胞存活率＝(给药组OD均值-空白对照OD值)/(细胞对照OD值-空白对照OD值)×100％，用Reed-Muench法计算药物对细胞的半数有毒剂量TC₅₀。

1.3上清液中HBsAg、HBeAg的检测