[发明专利]拐枣多糖的分离纯化方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种拐枣多糖的分离纯化方法，属于中药技术领域。

背景技术：

拐枣(Hovenia cerba Lindl.)为鼠李科拐枣属落叶乔木，俗称椇子、钩子、鸡脚爪、万字果、万寿果、龙爪。它全身都是宝，是一种果、药、材兼用的名贵树，有广阔的开发前景。果实中含葡萄糖及苹果酸钙，种子含枳椇皂苷，具有镇静、抗惊厥和降血压等功效。肉质可治风湿，有清热利利尿止渴降火解毒功效，树皮可活血，舒筋解毒，果梗性甘平，有健胃补血的作用，无毒，主治头风，润五脏利大小便。木质部含二羧酸三萜类化合物枳椇子酸(Hobeniaaced，C₃₀H₈₀O₅)。朱炯波等采用蒽酮-硫酸比色法测定其多糖含量为13.83％，目前国内外对拐枣活性多糖的作用研究尚未见报道。

多糖是天然有机化合物中的大分子物质，某些活性多糖有抗肿瘤和增强免疫功能的作用，一些多糖则具有复杂的控制细胞分裂和分化、调节细胞生长与衰老等多方面功能，改性的多糖则有抗HIV感染的作用，一些重要的生理过程如炎症反应，受体识别，免疫反应等都与多糖分子密切相关。已有的大量药理研究表明，植物多糖，特别是中药中的多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗感染、降血糖等多种生理活性，其原生药大多属补益类中药。虽然目前有很多合成化疗药物，但它们在杀死癌细胞的同时也同样累及正常细胞，临床上表现出很多副作用，特别是化疗药物对患者的免疫系统造成损害，但植物药的遗传毒性不太明显，表明中草药在抗癌抗突变方面有其独特的优势和广阔的应用前景。因此，多糖类免疫调节剂在肿瘤上的治疗很有吸引力。

离子交换树脂是一种多孔性交联聚合物，具有较高的比表面积，因而具有优良的吸附能力。离子吸附树脂属于两相结构：聚合物相和孔。聚合物相是由众多的纳米级聚合物微粒堆积而成的，微粒之间是孔。通过调整合成的方法可以调节为例大小，已寄孔径和比表面积等，从而使树脂具有不同的吸附性能。此外，吸附树脂按表面性质又可分为非极性、中极性、极性和强极性四种。不同的表面性质使吸附树脂具备不同的吸附机理和吸附性能，因此使树脂获得多方面的用途。有研究表明，用交换树脂代替常用的活性炭进行脱色，不但可加快过滤速度，而且脱色效果也好，同时还达到去杂的目的，从而提高产品的质量。树脂除脱色外，同时具有离子作用，能与溶液中的离子起离子交换反应，加上通用树脂还有较强的配位体基团(-OH、-NH3)，能对金属离子起络合作用，从而除去溶液中的金属离子，起着去杂的作用。

现有多糖脱色技术常采用活性炭脱色，虽价格低廉，但操作时必须使用粉末活性炭，存在脱色后溶液中的炭残渣难以完全出去的致命缺点；双氧水脱色需目的产物具有稳定性、不易氧化的特点，但由于双氧水脱色法是直接氧化提取液中的色素，并未脱除，且有可能将多糖链状结构破坏，氧化后的色素仍然作为杂质留在提取液中，并不能保证其最后品质。本发明采用离子交换树脂处理能力大，范围广，脱色率高，使得多糖保留率高，可再生重复利用，成本较低。

发明内容：

本发明的目的是在于提供一种拐枣多糖的分离纯化方法，从拐枣中经热水浸提、醇沉、离心DEAE纤维素柱层析除杂、离子交换树脂柱脱色、半透膜透析并干燥得成品。该方法提取得到较高纯度的拐枣活性多糖。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术措施：

拐枣多糖的分离纯化方法，其特征在于包括下列步骤：

(1)多糖提取液制备：将拐枣粉碎，加热水浸提2-3次，浸提24-48小时，过滤，合并浸提液，浓缩得拐枣浸膏；

(2)醇沉：将拐枣浸膏加入3-5倍80-90％的食用乙醇搅拌5-15分钟后静置沉淀，离心过滤除去上清液，收集沉淀物；

(3)除杂、脱色：将离心沉淀物用热水搅拌溶解，上DEAE纤维素柱，0-0.5mol/LNaCl溶液梯度洗脱，再上离子交换树脂柱吸附脱色，下柱液过滤后用半透膜透析，干燥即得成品。

所述步骤(2)中离心机的转速为5000-10000rpm。

所述步骤(3)中纤维素柱采用DEAE-23、DEAE-52。

所述步骤(3)中离子交换树脂可选苯乙烯系树脂和丙烯酸系树脂或两者混合树脂。苯乙烯系树脂可采用Asmit 265P、Duolite A171P阴离子树脂；丙烯酸系树脂可采用Asmit295、DoliteA172、IRA958S、A860阴离子树脂。

所述步骤(3)中半透膜为截留分子量4000-10000的半透膜透析袋，透析24-48小时。