[发明专利]一种新型多肽在类风湿关节炎诊断中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及免疫学诊断领域，具体而言，本发明涉及一种新型多肽(RAP)的制备方法和及其在类风湿关节炎诊断中的应用。 

背景技术：

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎症和骨破坏为病理基础的全身性自身免疫病，在我国的患病率为0.34％，国内有500万以上RA患者，且多为青壮年劳动力，是严重危害人类健康的主要致残性疾病。迄今为止，本病的发病机制尚不清楚，治疗主要为非特异性对症治疗，暂时缓解和改善病情，而不能从根本上控制滑膜炎症的发生和骨破坏的进展。 

近年来提出了对RA诊断具有高特异性的瓜氨酸相关自身抗体系统，包括AKA、APF、AFA、抗CCP抗体，并认为抗Sa抗体亦属于此系统，也有人称他们为RA早期诊断抗体谱，这些抗体对早期RA诊断具有较好的特异性。因此，寻找一种敏感性强、特异性高而又简便易行的血清学检测方法，对类风湿关节炎的早期诊断及治疗具有重要意义。 

大量自身抗体的出现是自身免疫性疾病的重要特征之一，但由于其发病机制尚不明确，难以直接利用自身抗原检测抗体。抗原表位(epitope)是抗原分子中识别、结合抗体的基础，因此是检测抗体的实际有效组分。以抗原表位肽或其模拟肽(mimotope)作为诊断工具有以下几个优势：1)可以提高诊断的灵敏度和特异性，避免了生物大分子易产生的非特异性结合[Deroo Set al(2001)Comb Chem High Throughput Screen 4：75-115]；2)扩大疾病诊断的范围，对于研究较少或难以体外应用的自身抗原如核酸抗原、多 糖抗原、脂类抗原，以模拟肽作为天然抗原的替代物进行诊断，也可以获得与天然抗原表位一致的结果[Bruce G(1997)Proc Natl Acad Sci USA 94：1955-1960；Jinaping Q et al(1999)Hyridoma 18(1)：103-109]；3)多肽制备、应用的成本低、易于质控。因此，自身抗原表位肽或其模拟肽[Meloen RH et al(2000)J Mol Recognit 13：352-359]的获得是制备自身抗体的多肽检测试剂的基础。基于噬菌体肽库技术的抗原表位确定技术，仅需要以患者血清样本为靶标，而无需天然的自身抗原信息，可以实现快速和简便筛选，并且成本低、结果可信度高。噬菌体肽库技术的另一个突出特点是，通过筛选可以同时获得某一疾病特异性的多个抗原表位肽，它们可能代表了天然抗原的主要免疫显性基团。天然生物大分子抗原通常由多个抗原表位组成，其中有一些在免疫反应中起着主要作用，被称为“免疫显性基团”，针对完整抗原的抗体主要是针对这些表位的多种“单克隆抗体”组成。以RA患者血清样品为靶标，通过噬菌体肽库筛选，获得RA特异性的抗原表位肽，是获得新型诊断试剂的基础。 

基于以上研究及目前的现状，申请人进行了多方面的研究及探索，通过下述实验策略获得了RA特异性的抗原表位肽。具体而言，申请人从10例RA患者血清中制备和纯化得到IgG，然后以线性十二肽库与抗体孵育，经筛选获得了与抗体特异结合的噬菌体克隆。之后通过ELISA确定阳性噬菌体克隆，测定阳性噬菌体克隆展示肽序列。化学合成其中的一个表位肽，命名为RAP，通过ELISA检测与患者血清的反应情况，表明其能特异的与患者血清中的IgG结合，而不与健康人血清反应。 

至此，申请人能够特异性与RA患者血清中IgG结合的抗原表位肽，由此完成了本发明。 

发明内容

具体地，本发明提供了： 

1.一种类风湿关节炎特异性的抗原表位，其具有下述的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)：KSPGTPSPVSQW。 

2.一种核苷酸序列，其特征在于编码权利要求1所述的氨基酸序列。 

3.权利要求1所述的氨基酸序列，其特征在于，其可作为组合物的一种组分。 

4.权利要求3的组合物，其特征在于，还可以包含药学上可接受的载体。 

5.权利要求1所述的核苷酸序列，其特征在于，其可作为组合物的一种组分。 

6.权利要求5的组合物，其特征在于，还可以包含药学上可接受的载体。 

7.权利要求1所述的抗原表位在类风湿关节炎诊断的用途。 

8.权利要求2所述的核苷酸序列在类风湿关节炎诊断的用途。 

附图说明

图1：表示阳性噬菌体克隆的竞争ELISA结果。 

图2：表示合成肽RAP与RA患者血清样品、健康人血清样品的结合。 

具体实施方式