[发明专利]一种抗菌肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子微生物学领域，具体的说是一种抗菌肽及其应用。

背景技术

随着渔业集约化养殖程度的不断提高，水域生态环境遭到了严重破坏，致使水产动物病害不断增多，病害问题已成为水产养殖业持续发展的瓶颈。传统的抗生素治疗不仅导致细菌耐药性的产生，而且造成了药物残留，严重影响水产品的质量，甚至威胁人类健康。因此，寻找新的抗病物质来代替抗生素就显得非常迫切。抗菌肽是一类广泛存在于微生物及动植物体内的小分子多肽，通常由通常是由30多个氨基酸残基组成，分子量为2-7kDa.抗菌肽的杀菌机制在于它能破坏细菌的细胞膜，导致细胞内容物溢出，最终引起细菌死亡。抗菌肽具有抗菌谱广且不易产生耐药性、热稳定性强等传统抗生素药物无可比拟的优势，因而越来越受到人们的重视。

抗菌肽最初是在植物中发现。近年来，越来越多的研究发现许多水产动物中也存在抗菌肽。研究表明，水产动物的抗菌肽不仅具有抗菌活性，而且还有抗病毒及抗肿瘤活性。无脊椎水产动物具有非特异性免疫系统，而鱼类则兼有特异性和非特异性免疫系统。在水产动物抵御病原菌感染的过程中，非特异性免疫起着重要作用。由于抗菌肽是非特异性免疫系统的重要组成部分，在抵抗病原感染过程中起重要作用，因此，抗菌肽在水产养殖病害防控中具有巨大的应用潜力。

发明内容

本发明目的在于提供一种抗菌肽及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种抗菌肽T1-17为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。

抗菌肽T1-17的应用：所述抗菌肽T1-17具有抑制细菌的作用。

所述抗菌肽T1-17具有抑制鱼类细菌的作用。所述抗菌肽T1-17具有抑制迟缓爱德华氏菌或鳗弧菌的作用。

本发明具有如下优点：本发明的抗菌肽具有高效抑菌作用可以有效抑制多种鱼类致病菌，因此可望应用于鱼类病害防治。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

实施例1

本发明的抗菌肽T1-17具序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列。

序列表SEQ ID No.1为：

KCRRRKVHGPMIRIRKK

(a)序列特征：

●长度：17

●类型：氨基酸序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

(b)分子类型：蛋白质

(c)假设：否

(d)反义：否

(e)最初来源：人工合成

本实施例合成的抗菌肽T1-17按照BOC法固相多肽合成法，最终得到纯度大于90％的抗菌肽T1-17。合成时将一个Boc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上(例如不溶性的高分子树脂，即氯甲基高分子树脂)，用TFA脱除Boc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过DCC活化、偶联下一个氨基酸，最终脱保护多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。

参见Schnlzer M，Alewood P，Jones A，Alewood D，Kent SBH.In situ neutralization in Boc-chemistry solid phase peptide synthesis.Int J Pept Res Ther.2007；13：31-44。另，本实施例的抗菌肽由上海生物工程技术服务有限公司(上海，中国)利用玻璃反应柱(机器型号：p3050)合成。

实施例2

抗菌肽T1-17的应用

1)迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌制备。在LB培养基中培养迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌分别至OD₆₀₀为0.5，然后离心(5000g，4℃)10min。收集菌体，将其悬浮于PBS中至终浓度为1x10⁶cfu/ml。

所述PBS组成成分按重量百分比计：0.8％ NaCl，0.02％ KCl，0.358％Na₂HPO₄.12H₂O，0.024％ NaH₂PO₄。