[发明专利]优化的草鱼α干扰素编码基因及其应用

权利要求书

1.序列表的序列2所示的DNA。

2.含有序列表的序列2所示的DNA的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系。

3.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体为将序列表的序列2所示的DNA插入pBV220的多克隆位点得到的重组质粒；所述重组载体优选为将序列表的序列2所示的DNA插入pBV220的BamHI和EcoRI位点间得到的重组质粒。

4.如权利要求2所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌是将序列表的序列2所示的DNA导入大肠杆菌DH5α得到的重组菌；所述重组菌优选为将权利要求3所述重组载体导入大肠杆菌DH5α得到的重组菌；所述重组菌最优选为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)DH5α/pBV220-GCIFNα，它的保藏编号为CGMCC No.4111。

5.一种制备α干扰素的方法，是将权利要求2或4所述的重组菌，40～43℃诱导4～8小时，优选42℃诱导6小时，然后破碎菌体，收集包涵体、洗涤包涵体、溶解包涵体并将其复性，得到含有α干扰素的溶液。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将所述含有α干扰素的溶液进行蛋白纯化的步骤；

所述蛋白纯化的方法如下：将所述含有α干扰素的溶液用醋酸调节pH值为5.5-9.5，采用HiLoad 26/10 SP Sepharose High Performance进行阳离子交换层析，用洗涤缓冲液甲冲洗5个柱体积，然后用洗涤缓冲液乙洗脱1-10个柱床体积，收集280nm光照下紫外吸收值大于200的洗脱液，得到的溶液即为α干扰素溶液；所述洗涤缓冲液甲的pH为5.5-9.5，由Tris·Cl、NaCl和水组成，Tris·Cl浓度为0.1mol/L，NaCl浓度为0-150mM；所述洗涤缓冲液乙的pH为5.5-9.5，由Tris·Cl、NaCl和水组成，Tris·Cl浓度为0.1mol/L，NaCl浓度为150-2000mM。

7.权利要求5或6所述方法制备得到的α干扰素溶液。

8.权利要求1所述DNA或权利要求2至4中任一所述的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系在制备α干扰素中的应用。

9.权利要求1所述DNA或权利要求2至4中任一所述的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系在制备病毒抑制剂中的应用；所述病毒为传染性造血器官坏死病毒和/或草鱼出血病病毒；所述染性造血器官坏死病毒具体为WRAC毒株。

10.权利要求1所述DNA或权利要求2至4中任一所述的重组载体、重组菌、表达盒或转基因细胞系在制备如下(a)和/或(b)中的应用；

(a)治疗和/或预防鱼病毒性疾病的制剂；

(b)提高虾存活率的制剂；

所述鱼病毒性疾病具体为草鱼出血病；所述虾具体为中国对虾。