[发明专利]海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F

权利要求书

1.一种海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，具有以下特征：

(1)外观：白色、微黄色或黄色粉末状微球颗粒；

(2)粒径：粒径范围为0.1～1.0μm；

(3)酶活力：140～280U/g；

(4)存储半衰期：在4℃保存条件下，海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F的存储半衰期为180～220d；

(5)操作半衰期：在37℃，pH值2.0条件下，海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F的操作半衰期为8～12d；

(6)热稳定性：在30～60℃的温度范围内，海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F的酶活力应无显著降低；

(7)酸碱稳定性：在pH值为2～7的范围内，海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F的酶活力应无显著降低；

(8)在有机溶剂中的稳定性：海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F在有机溶剂中浸泡60min后，酶活力应无显著降低，仍为初始酶活力的90％以上。

2.一种海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F的制备方法，其特征在于：

(1)准确称取一定量的海藻酸钠溶于水中，配制成4.0～7.2％(wt/v)的海藻酸钠溶液，然后在0℃的冰浴条件下，将复合酶F加入到海藻酸钠溶液中，充分搅拌均匀后静置除去气泡，使得复合酶F的最终浓度为2.8～5.0％(wt/v)；

(2)将制备好的海藻酸钠复合酶F溶液与浓度为1.2～4.5％(v/v)的交联剂溶液等体积混合，于0℃的冰浴条件下，低速搅拌反应150～210min，然后与含有3.0～5.6％(v/v)乳化剂的油相混合，同样于0℃的冰浴条件下，调节搅拌速度至850～1450r/min，搅拌反应30～90min，得到乳化完全的海藻酸钠复合酶F的乳液体系，其中油相与海藻酸钠复合酶F溶液的体积比为1.0～5.0∶1；

(3)使用滴定装置将乳化完全的海藻酸钠复合酶F乳液滴入事先已超声溶解均匀的浓度为2.2～5.6％(wt/v)的固化液中，同时调节搅拌速度至1000～1600r/min，搅拌反应90～150min，使海藻酸钠凝固成微球，最后再加入2.5％(v/v)的破乳剂溶液，混合搅拌均匀，静置沉淀，分层后取下层液体，于5000rpm下离心10min，收集固体，再依次用2.5％(v/v)的破乳剂溶液和蒸馏水反复洗涤所收集的固体各3次，同样于5000rpm下离心10min，收集固体并真空冷冻干燥24h，所得到的微球即为海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其中固化液与海藻酸钠复合酶F乳液的体积比为1.0～5.0∶1。

3.按照权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其特征在于所述的交联剂选自醛类、碳化二亚胺中的任何一种。

4.按照权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其特征在于所述的乳化剂选自丙二醇单硬脂酸酯、Span80、Span60、OP-7中的任何一种。

5.按照权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其特征在于所述的油相选自蓖麻油、液体石蜡、大豆油、花生油中的任何一种。

6.按照权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其特征在于所述的滴定装置选自孔径为0.1～0.5mm的注射器、喷雾器中的任何一种。

7.按照权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其特征在于所述的固化液选自CaCl₂、MgCl₂、BaCl₂中的任何一种。

8.按照权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，其特征在于所述的破乳剂选自Tween60、Tween80、Tween40、OP-10中的任何一种。

9.权利要求2所述制备的海藻酸钠负载蛋白水解复合酶F，可用于胶原的提取和制革中的低pH值软化。