[发明专利]一种结核病家兔皮肤病理药物评价模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病动物模型的构建方法，具体地说是一种结核病家兔皮肤病理药物评价模型的构建方法，属于医疗领域。

背景技术

结核病是一种和全身免疫状况密切相关的疾病，但主要表现为一种局部病理损伤。随着结核耐药问题越来越严重，传统针对结核分枝杆菌的抗结核化学药物治疗对部分疾病不再有效，人们亟需开发新的药物来治疗结核病。结核病干酪样坏死和液化以及空洞的形成是人肺结核病特征性的危险的病理改变，常常成为播散的病源。坏死组织液化是人肺结核病向恶性方向发展的关键环节，液化组织可为结核杆菌细胞外生长提供丰富的培养基，大量生长活化的结核杆菌释放高水平的结核菌素样产物，造成组织迟发型超敏反应，破坏性很强。空洞的形成又为结核菌的肺外播散提供有利条件，大量结核杆菌通过空气传播，导致人群感染。虽然对于肺结核的免疫病理已有一些研究基础，然而坏死组织液化的发生机制和影响因素仍不明确。

人类疾病的动物模型(animal model of human disease)是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便，更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。

动物模型对于了解结核性肉芽肿转归的过程和免疫机制有重要价值。已有多种动物模型被用于结核的病理学研究，常用的动物模型中，小鼠不会发生液化坏死，猿猴和家兔可形成与人体结核病灶近似的坏死和液化。其中，家兔感染结核杆菌后，病理学特点与人近似，尤其是可以形成液化和空洞。家兔感染牛分枝杆菌后可形成以干酪样坏死为中心的慢性纤维空洞型结核，与结核杆菌在人体中引起的病变相似。肺部模型虽然病理改变更接近人肺结核，但由于观察不便，一定程度上限制了疾病的研究和药物筛选模型的建立。所以建立结核皮肤病理模型，尤其是液化病理模型，对结核病病理和细菌致病性可以进行直观研究，可以用于对相关病理进行干预的药物筛选模型。

研发调节机体免疫应答的药物，通过干预免疫病理进程来治疗结核是一个有效的途径。目前还缺乏有效的直观的动物模型来评价针对结核免疫病理的药物。

发明内容

本发明的目的在于，针对人类结核病的治疗，建立了一种家兔皮肤结核模型，利用家兔皮肤结核病理模型来评价干预结核免疫病理的药物，为结核性肉芽肿的形成和坏死组织的液化的治疗提供研究模型。

阻止坏死液化空洞形成的药物是临床上治疗结核病患者的措施之一，有效的药物应该可以阻止液化空洞的形成和扩大，控制液化空洞内结核杆菌的生长繁殖和活化，防止病原播散，减轻迟发型超敏反应破坏组织的程度，这些方面对于结核病人的治疗以及防止病原传播具有极其重要的意义。免疫相关药物对于结核病人机体内局部或全身的免疫状态有一定影响，可能调动一些免疫因子的活化，启动相关的免疫程序，调动细胞免疫或体液免疫，对结核病的转归产生影响。

本发明的技术方案为：一种结核病家兔皮肤病理药物评价模型的构建方法，包括以下步骤：

（1）选择家兔；

（2）每天对家兔注射免疫药物，选择家兔的腹部两侧皮内注射；

（3）对上述步骤（2）中的家兔在注射免疫药物的第15-20天进行卡介苗免疫注射；

在BCG注射前15-20天给家兔注射或口服所要评价的免疫调节药物有助于使得在BCG注射时机体免疫状况达到了药物所拟调节的状态，从而有效评价药物。BCG注射后要继续观察30天左右，因为一定量卡介苗免疫注射家兔皮肤后，会发生明显的皮肤病理改变（如肉芽肿、脓肿液化、破溃等），病理特征随时间的趋势有所变化。

（4）对上述步骤（3）中的免疫后的家兔皮肤处发生的病理变化进行直观观察测量及细菌性和病理学检查，构建病理模型。

所述的步骤（1）中的家兔为健康的新西兰白兔。

所述的步骤（2）中的免疫药物为，免疫增强剂：重组人白介素-2和重组人干扰素-r；免疫抑制剂：环磷酰胺和地塞米松。

所述的步骤（3）的卡介苗免疫注射时间为注射免疫药物的第17天。

所述的步骤（3）的卡介苗为5×10⁷ CFU/ml的菌液。