[发明专利]一种鞘氨醇单胞菌DX-T3-03菌株及其提取方法

说明书

技术领域

本发明属于鞘氨醇单胞菌菌株领域，特别涉及一种鞘氨醇单胞菌DX-T3-03菌株及其提取方法。

背景技术

随着采矿业的发展和重金属在电镀、冶金、化工和制药业等方面的应用，重金属污染日趋严重。由于重金属在土壤中难降解、难迁移、危害期长等特点，已使得土壤重金属污染成为国内外普遍关注的环境问题之一。其中重金属锌既是重要的营养元素，也是污染元素。锌曾被誉为“生命之花”，是维持机体正常生长发育、新陈代谢的重要物质。我国是产锌大国，最大的消费领域是镀锌工业，消费量约占锌总产量的30％40％。除此之外，其它工业产生的含锌废水也不容忽视。许多实验和流行病学调查已经证实，如果锌在人体内含量过高，将会抑制吞噬细胞的活性和杀菌力，从而降低人体的免疫功能，对疾病易感性增加。最近的科学研究表明，摄入过量的锌，会对人体造成一定的伤害，甚至可引起中毒，以至死亡；同时锌中毒会导致胰腺、肾和体内多元系统(Muitisystem)功能紊乱甚至死亡。

对于重金属的处理，由于传统的物理或化学方法常伴随二次污染，且运行费用高，操作复杂，已越来越不适宜现代污染治理的需要。近年来，微生物在重金属污染治理的潜在应用前景，使得其在处理重金属污染问题上成为国内外一个新型的研究方向。因此，筛选新的具有高抗性能力的微生物并研究它们的抗性机理也成为当前的主要任务之一。

苯酚是造纸、炼油、制药、焦化等工业过程中产生的一种有机污染物，会对动、植物产生有毒甚至致命的作用。大量酚类物质及其衍生物在土壤和水体中的排放和积累导致了生态环境的日趋恶化，许多国家已将其列入环境优先控制污染物的黑名单中。近年来，随着生物新技术的发展，利用微生物降解法处理高浓度含酚废水是一种经济高效且不会产生二次污染的方法，相关方面的研究越来越受到人们的关注。但含酚工业废水中往往含有较高浓度的重金属离子，而高浓度重金属离子的存在会抑制微生物对苯酚的生物降解。因此，获得有一定耐受重金属能力的苯酚降解菌在含酚工业废水的生物处理中将具有突出的应用潜力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鞘氨醇单胞菌DX-T3-03菌株及其提取方法，该菌株对锌的耐受性高达4mM/L的同时，苯酚的降解率高达88％，营养要求不高，对苯酚有较好的降解能力，在生物治理含酚工业废水和重金属双重污染中具有重要应用潜力；提取方法简便快捷，成本低，对环境友好。

本发明的一种鞘氨醇单胞菌DX-T3-03菌株，其特征在于：该菌株对锌具有高抗性并且具有降解苯酚能力。

本发明的一种鞘氨醇单胞菌DX-T3-03菌株的提取方法，包括：

(1)定向驯化

在矿区取土制成土壤悬液按5wt％的接入量接种于无机盐培养基中，以梯度压力式驯化法驯化2个月；

(2)菌株的富集分离和纯化

将上述驯化后的样品静置，取上层水样作梯度稀释，然后每种稀释浓度分别取1mL菌液于接种到固体培养基进行富集培养，如此反复多次确保长出纯的单一菌株，再接种到斜面培养基，即可。

所述步骤(1)中的无机盐培养基为(NH₄)₂SO₄ 10.0g，KH₂PO₄ 7.5g，Na₂HPO₄ 10.0g，FeCl₃ 0.0125g，MgSO₄·7H₂O 0.015g，蒸馏水1000mL，pH＝6.5～7.0。

所述步骤(1)中的梯度压力式驯化法为在无机盐培养基中，同时加入梯度浓度的滤菌苯酚和滤菌Zn²⁺溶液，使培养基中同时含有苯酚和Zn²⁺且两种物质浓度均依次升高，即苯酚300、400、500、600、700、800、900、1000mg/L，Zn²⁺浓度0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mM/L，改变浓度的间隔时间为6～7d，于30～35℃，振荡速率150r/min条件下进行驯化培养。

所述步骤(2)中的梯度稀释为10^-1～10^-10的梯度稀释。