[发明专利]野生茄子耐盐基因StBADH抗除草剂植物表达载体

权利要求书

1.野生茄子耐盐基因StBADH抗除草剂植物表达载体，其特征在于由野生茄子耐盐基因StBADH与抗除草剂植物表达载体构成。

2.根据权利要求1所述的野生茄子耐盐基因StBADH抗除草剂植物表达载体，其特征在于所述的抗除草剂植物表达载体为分别用EcoR I/Hind III双酶切全序列合成的pT800DNA片段和抗除草剂植物表达载体pCAMBIA3301，回收pT800中843bp的片段与pCAMBIA3301中11273bp的大片段，连接所述两个片段得到的中间载体pCAMBIA3301-T800。

3.权利要求2所述的野生茄子耐盐基因StBADH抗除草剂植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1)野生茄子耐盐基因StBADH的克隆

选用野生茄子作为试验材料，取幼嫩叶片，提取总RNA，取其2μg反转录cDNA，用RNase消化cDNA产物，根据NCBI上公布的番茄(Solanum lycopersicum)amadh2序列信息设计特异引物，进行高保真聚合酶链式PCR反应，在合成的野生茄子叶片cDNA中扩增含Sma I和Xba I两个酶切位点的StBADH基因，PCR产物用凝胶回收试剂盒回收纯化；

2)StBADH加多聚腺苷酸‘PolyA’尾反应

按照DNA A-Tailing试剂盒说明，以步骤1)得到的PCR纯化产物为反应底物，在StBADH基因3’端加上多聚腺苷酸‘PolyA’尾；StBADH加‘PolyA’尾反应的产物连入pMD19-T载体中，转化TOP10感受态细胞，测序验证，得到pMD-StBADH；

3)中间载体pCAMBIA3301-T800的构建

全序列合成含有CaMV35S启动子、PUC18 Polylinker多克隆位点、Nos终止子的pT800DNA片段SEQ ID NO.2，其中，CaMV35S启动子的上游和Nos终止子的下游分别引入了EcoRI和HindIII酶切位点；所述的pT800片段与pCAMBIA3301分别EcoR I/Hind III双酶切，回收pT800中843bp的片段与pCAMBIA3301中11273bp的大片段，用T4DNA连接酶连接，连接产物转化TOP10感受态细胞，质粒用AxyPrep质粒DNA小量试剂盒提取纯化，EcoR I/Hind III双酶切验证，得到构建成功的中间载体pCAMBIA3301-T800；

4)StBADH抗除草剂植物表达载体pCAMBIA3301-StBADH-T800的构建

含Sma I和Xba I两个酶切位点的pMD-StBADH与中间载体pCAMBIA3301-T800分别SmaI/Xba I双酶切，回收pMD-StBADH中1522bp的小片段与pCAMBIA3301-T800中12107bp的大片段，用T4DNA连接酶连接，连接产物转化TOP10感受态细胞，质粒用AxyPrep质粒DNA小量试剂盒提取纯化，Sma I/Xba I双酶切验证，得到构建成功的抗除草剂植物表达载体pCAMBIA3301-StBADH-T800。