[发明专利]一种稀有放线菌的分离方法

说明书

所属技术领域

本发明属于微生物技术领域，应用于稀有放线菌的分离。

背景技术

放线菌是抗生素、酶和酶抑制剂的重要来源，稀有放线菌(rare actinomycete)指用常规的分离程序和分离手段进行样品分离时，一些出现频率要比常见的链霉菌低得多的类群。也有学者把所有的非链霉菌归为稀有放线菌。放线菌的最主要分离源是土壤，链霉菌是其优势菌群，而非链霉菌的分布密度相对来说非常低。

迄今许多已知具有商业意义的代谢产物的发现，几乎均是依靠新的筛选系统及新的微生物分离和鉴定技术的使用。然而，由于长期以来在天然产物的筛选过程中使用传统的菌种分离和鉴定技术，导致大量缺乏明确鉴定的菌株被重复分离和使用，因此从中发现新化合物的概率在逐渐降低，严重的影响着新的生物活性物质的筛选效率。通过新的和稀有放线菌的分离，寻找和发现新的生物活性物质和代谢产物，其潜力仍然是其他生物无法比拟的。

土壤是微生物的大本营，用放线菌选择培养基和常规的稀释平板涂布法偏向于分离数目占优且在培养基上快速生长的优势放线菌，而忽视生长缓慢、数目稀少、紧密结合于土壤微小颗粒的放线菌。稀释法只适合分离容易进入水溶液的微生物或其繁殖体，因而特别偏向于多产孢子的真菌、单细胞的细菌、有鞭毛可运动的、在土壤中数量占优势的菌群，而有些放线菌产生的假根容易长入营养基质，不容易与土壤颗粒分离，还不易产生无性孢子，因而不容易进入溶液，使用稀释法难以分离这类放线菌。如果不经过无菌水淘洗以土壤样品直接接种于放线菌选择培养基，则容易受到其他优势放线菌、甚至细菌和真菌的干扰而难以分离。

发明内容

本发明的目的是减少土壤样品中优势菌群的干扰，提高分离稀有放线菌的成功率。

本发明的目的是通过以下关键技术方案实现的：

一种稀有放线菌的分离方法，包括无菌水淘洗法和沉淀泥接种法这两个关键技术。

无菌水淘洗法是用无菌水对土壤样品进行多次淘洗以减少优势菌的干扰。

沉淀泥接种法是将经过无菌水多次淘洗的土壤样品沉淀泥接种于放线菌选择培养基上以提高分离稀有放线菌的成功率。

本发明的有益效果是：可以极大减少能进入水溶液的微生物的干扰，而直接分离依附于土壤颗粒上的放线菌，提高分离稀有放线菌的成功率。

具体实施方式

本发明的一个实施例包括三个步骤：1)通过无菌水淘洗法减少土壤样品中容易进入水溶液的优势菌的干扰；2)通过选择培养基提高分离稀有放线菌的选择性；3)通过沉淀泥接种法接种纯化。详细具体的实施方案如下：

1)无菌水淘洗法步骤是：a)用灭菌三角瓶盛装土样少量；b)往三角瓶中倒入冷却后的无菌水；c)摇晃混匀；d)倒掉上层悬浊液；e)重复本步骤bcd项数次。

2)选择培养基配制步骤是：a)用高氏1号固体培养基倒平板；b)用无菌水加重铬酸钾配制3％溶液；c)往平板中加入3％重铬酸钾溶液100uL后用无菌玻璃涂棒涂布均匀。

3)沉淀泥接种法步骤是：a)将步骤1中第e步剩下的沉淀泥接种于步骤2中第c步制备的平板培养基上；b)用薄膜密封平板口以防培养基干燥；c)将接种密封后的平板放30℃温箱倒置培养；d)待长出菌落后挑取菌落转接入新的平板培养基中纯化。