[发明专利]基于寡核苷酸链的汞离子荧光检测芯片、制作及使用方法

权利要求书

1.一种汞离子荧光检测芯片，其特征在于所述的检测芯片基于寡核苷酸链，利用Hg²⁺特异性地与DNA的两个胸腺嘧啶碱T共价结合，介导T-T配对形成稳定的T-Hg²⁺-T结构。

2.制作如权利要求1所述的检测芯片的方法，其特征在于将合成的富T寡核苷酸链固定在经修饰的玻片上；然后荧光标记的互补链与固定在玻片上的富T寡核苷酸链杂交，形成双链结构。

3.按权利要求2所述的制作方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：

(1)化学修饰的富T寡核苷酸链固定在化学修饰的玻片上

2-20μM化学修饰的富T寡核苷酸链按1∶1体积比加入2×点样缓冲液，通过以接触式Cartesian microarray制作系统点阵于化学修饰的载玻片表面；点样完毕，将玻片置于70％湿度，室温条件下48～72h进行固定；分别用0.2％SDS、去离子水洗2次，每次2min，然后用醛基封闭液封闭15min；再依次用0.2％SDS、去离子水各洗2次，每次2min，吹干；

(2)互补链与富T寡核苷酸链的杂交

标记了荧光基团的互补链用杂交液稀释成1-10μM。将稀释好的互补链溶液加在芯片的斑点处，盖上盖玻片。芯片置于25℃湿盒中，12-16h后用10mM MOPS，100mM NaNO₃，pH 7.2洗5-10min，吹干。

4.按权利要求3所述的制作方法，其特征在于步骤(1)中所述的封闭液是由0.1g硼氢化钠、30mlPB S和10ml质量百分数为99％的乙醇组成。

5.使用如权利要求1所述的芯片的方法，其特征在于用杂交液稀释制备好不同浓度的Hg²⁺，加不同浓度的Hg²⁺溶液于芯片斑点处，室温，反应10-60min；用10mM NaNO₃，pH7.2洗3次，吹干；然后用General Scanning公司的芯片信号分析系统Scanarray 3000扫描并分析结果。

6.按权利要求5所述的使用方法，其特征在于

①加入100μM、10μM的Hg²⁺后反应2min，相对于缓冲液对照组，荧光强度分别下降了63％，45％；20min完成了95％的反应；

②在Hg²⁺离子存在的情况下，芯片斑点处荧光强度减弱，当Hg²⁺浓度为10nM时，与缓冲液组的荧光强度相比，斑点处荧光强度减弱20％，随着Hg²⁺浓度增加，荧光信号逐渐减弱。

7.按权利要求5所述的使用方法，其特征在于用10mM MOPS，100mM NaNO₃，pH 7.2稀释制备10μM的不同的二价金属离子，加不同二价金属离子溶液于制备好的芯片斑点处，室温，反应1h；用10mM MOPS，100mM NaNO₃，pH 7.2缓冲液洗3次，吹干；用General Scanning公司的芯片信号分析系统Scanarray 3000扫描照片；只有在Hg²⁺存在的情况下，芯片斑点处荧光强度大大减弱，Hg²⁺为10μM时，与缓冲液组的荧光强度相比，荧光强度减弱了85％；而当加入10μM其他二价金属离子，荧光强度只有在0.9％～2.6％范围的微小的减弱。

8.按权利要求5所述的使用方法，其特征在于所述的芯片检测Hg²⁺的检测极限为1nM，检测的范围为1nM-10μM。

9.按权利要求1所述的荧光检测芯片的应用，其特征在于所述的检测芯片用于检测掺入在饮用水中的Hg²⁺。