[发明专利]一种以SOX2蛋白的表达来诊断乳腺癌的方法

说明书

技术领域

本发明属于一种医学诊断用的方法，具体的说是一种通过检测乳腺组织中SOX2蛋白的表达情况来判断乳腺肿块是良性还是恶性的方法，该方法是通过免疫检测技术实现的，属于临床免疫诊断方法，特别是运用免疫组化方法检测SOX2蛋白从而判断乳腺癌的方法。

背景技术

乳腺癌是威胁妇女健康的重要恶性肿瘤疾病，其早期主要症状表现为：乳腺肿块、乳腺疼痛及乳头溢液及皮肤改变、腋窝淋巴结肿大等症状及体征，目前临床如遇可疑情况都可借助于现代影像学检查和广义的肿瘤标记物检查以及病理学诊断及早做出判断。近年来乳腺癌发病率有上升趋势，但如果早发现、早治疗，约90％乳腺癌患者能生存。因此，对恶性乳腺癌的早期快速诊断可以对治疗产生积极的作用。

SOX2(SRY-Related HMG-Box Gene 2)是SOX家族的一个成员，是干细胞的标志性基因之一，存在干细胞的核中，是一种维持干细胞特性的重要的转录因子，参与复杂的转录调控网络，在维持胚胎干细胞及癌症干细胞的多能态性及自我更新能力方面起到至关重要的作用。SOX2在早期胚胎发生、抑制元神经分化和晶状体发育等多种重要的发育事件中都起着关键作用，同时，SOX2与癌症干细胞的致癌能力密切相关。因此癌症干细胞中的SOX2极有可能对癌症的发生进行密切的调节，并有可能成为肿瘤发生的标志蛋白。我们通过对319例乳腺组织芯片(包括正常及乳腺癌)的免疫组化染色分析发现SOX2在大部分的乳腺癌组织中高表达，而在正常或癌旁组织中不表达或低表达，表明SOX2可以成为诊断乳腺癌的筛选蛋白。即在乳腺组织中表达程度越高，是乳腺癌的可能性越大。(见表1)

表1.SOX2表达水平与乳腺癌发生之间的关系

本实验以SOX2阳性细胞数占整个组织的百分比作为阴性及阳性结果的判断，即＜10％为阴性(-)，而≥10％为阳性(+)。结果表明SOX2随着乳腺组织从正常转向恶性，表达量明显增强。χ²检验分析显示SOX2与乳腺癌的发生具有显著的相关性。

发明内容

针对上述情况，本发明通过免疫组化的方法检测病理组织中的SOX2分子，以此判断是否是乳腺癌。具体的讲就是，通过对病理组织的免疫组化反应，检测该组织中SOX2分子的表达数量，根据免疫组化反应的结果来判断乳腺癌。

其技术内容包括：免疫组化反应和显微镜观察等步骤。

本发明是通过以下技术方案实现的：

1.脱蜡和水化：

具体步骤如下：

①组织切片置于二甲苯Ⅰ中浸泡10分钟，

②组织切片置于二甲苯Ⅱ浸泡10分钟，

③组织切片置于无水乙醇中Ⅰ浸泡10分钟，

④组织切片置于无水乙醇Ⅱ浸泡10分钟，

⑤组织切片置于95％乙醇中浸泡10分钟，

⑥组织切片置于80％乙醇中浸泡10分钟，

⑦组织切片置于自来水中浸泡1分钟，

⑧组织切片置于蒸馏水中浸泡5分钟。

2.抗原修复，将10mM的Citrate Buffer(pH 6.0)通过微波炉，加热10分钟，放入组织切片中低火加热10-15分钟，在室温下晾凉。

3.用超纯水洗处理过的组织切片3次，每次五分钟。

4.将3％双氧水溶液滴加在载玻片上，室温静置10分钟，甩去多余液体。

5.用超纯水洗2次，各五分钟

6.滴加封闭液(正常山羊血清，5％BSA溶液)，在室温下孵育一小时，甩去多余液体。

7.滴加一抗(1∶100)50μL，室温静置1小时。

8.TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。

9.滴加二抗(1∶100)50μL，室温静置0.5小时。

10.TBST缓冲液洗3次，每次5分钟。

11.滴加三抗(1∶100)50μL，室温静置0.5小时。

12.TBST缓冲液洗4次，每次5分钟。

13.DAB显色，在显微镜下掌握染色程度，在达到满意效果后放入清水中终止染色，后用自来水冲洗10分钟。

14.苏木精复染20秒，自来水冲洗10分钟。

15脱水、透明：

具体步骤如下：

①组织切片置于80％乙醇中浸泡30秒，

②95％乙醇中浸泡3分钟，

③无水乙醇中Ⅱ浸泡5分钟，

④无水乙醇Ⅰ浸泡5分钟，

⑤二甲苯Ⅱ中浸泡5分钟，

⑥二甲苯Ⅰ浸泡5分钟，

16.树脂封片、镜检。

附图说明