[发明专利]磁性载基因脂质超声微泡造影剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种作为既可影像增强又可对肿瘤进行治疗的磁性载基因脂质超声微泡造影剂的制备方法。  

背景技术

本发明所涉及的是新型脂质超声微泡及其制备方法，将纳米技术引入超声微泡的制备中，通过纳米技术制备出Fe₃O₄磁性纳米粒并进行PEI的表面修饰，经修饰后的Fe₃O₄磁性纳米粒可有效的与真核表达质粒相结合，进而将DNA/PEI/ Fe₃O₄复合物包裹入脂质微泡中，形成载基因磁性脂质微泡。从而使其不仅具有影像增强功能而且具有基因治疗和热疗的双重抗肿瘤细胞效能。

肿瘤热疗是利用物理方法使组织加热, 达到杀灭癌细胞的特定温度以治疗恶性肿瘤的一种治疗手段。目前肿瘤热疗技术在临床上已得到了广泛的应用，如射频、微波、激光等。但因对肿瘤的靶向能力差，易导致周围正常组织产生可逆性损伤而使其应用受到限制。同时对深层部位肿瘤热疗，由于人体组织的不均匀性，使得热分布不均匀，疗效较差。近年来, 随着纳米技术的突飞猛进, 将磁性纳米材料应用于肿瘤热疗能够克服目前加热技术的不足。在纳米颗粒用于治疗肿瘤时，理想的是纳米颗粒只存在于肿瘤组织中，而不出现在其他组织中，从而将治疗局限于病灶，不致损伤正常组织。1997年德国学者Jordan等利用磁性纳米粒在交变磁场（alternating magneticfield，AMF）作用下能够将吸收的磁能转化为热能的特点来治疗肿瘤，这种新方法称为磁流体热疗(magnetic fluid hyperthermia,MFH)。处于交变磁场中的磁性纳米颗粒主要是通过磁滞损耗来大量吸收磁场能量产生热量的。磁流体更易被肿瘤细胞摄取，在肿瘤中分散均匀，达到细胞内加热的目的，并且能够随着肿瘤分裂进入子细胞中，具有更强的杀伤力。有学者将脂质膜包裹纳米磁性微粒，制成磁性脂质体(magnetic liposomes,MLs)，由于脂质膜和细胞膜的成份相似，这种磁性脂质体通过细胞的融合或吞噬作用就可以更快更多的进入细胞内部，从而进一步增强细胞内热疗的疗效。

肝癌是目前常见且病死率较高的恶性肿瘤之一，且常伴有肝硬化腹水和肝内转移，故手术切除的可能性小。近年来，随着分子生物学和基因工程技术的不断进步，为肿瘤的治疗开辟了新的途径，肝癌的基因治疗已显示出广阔的应用前景。国内多项临床研究证实P53基因对肝癌治疗的有效性。目前基因治疗的研究和临床应用中常用的病毒载体和非病毒载体都存在无法克服的免疫反应、细胞毒性与安全性的问题，限制基因治疗的发展。研究证实,纳米粒与DNA的连接多通过静电吸引作用来完成。DNA的磷酸骨架所带的负电荷只能与表面带正电性的载体结合。因此,需要利用生物活性分子对纳米颗粒的表面进行改性，使其表面携带阳离子物质，以起到防止纳米颗粒团聚,并有利于结合DNA分子的作用。PEI是目前应用较有效的阳离子聚合物基因载体。它的结构特点是分子中每隔2个碳原子就有一个活性氮原子(—NH₂)，这些氮原子在生理条件下可以发生质子化而带上正电荷（—H_３＋），从而与DNA上带负电荷的磷酸基团通过静电吸附作用而形成复合物。本研究中的结果显示，以聚乙烯亚氨（PEI）修饰的Fe₃O₄纳米颗粒作为基因转运载体可有效的与DNA结合形成Fe₃O₄纳米粒/DNA复合物。