[发明专利]一种精液白细胞过氧化物酶检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测试剂盒和检测方法，特别是涉及一种定量检测人精液标本中白细胞浓度的试剂盒，还涉及利用该试剂盒来检测人精液标本中白细胞浓度的方法，主要用来筛查男性生殖道感染，还涉及利用该试剂盒检测试剂是否有效的方法。

背景技术

人附属性腺感染、自身免疫性睾丸炎、精索静脉曲张，吸烟、酗酒、接触刺激性有毒物质、经常热水浴等，均可导致人精液白细胞精子症，影响精液质量，降低受孕率。目前相关的人精液标本中白细胞浓度的实验室检测方法主要有：精液直接镜检法、吉姆萨染色法、瑞氏染色法、免疫细胞染色法等。精液直接镜检法是直接将精液涂片计数精液内的圆细胞，不能区分白细胞、上皮细胞、精原细胞；吉姆萨染色法和瑞氏染色法能准确判断白细胞，操作步骤较多且陈旧性白细胞不易识别；免疫细胞染色法系通过白细胞膜表面共同抗原(CD45)进行免疫组化染色，检测结果最为准确，但成本较昂贵、操作步骤繁琐。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种性能稳定、操作简单、易于临床推广应用、能开展质量控制工作的精液白细胞过氧化物酶染色试剂盒，同时，本发明还提供一种利用该试剂盒进行检测的方法学特异、操作简单、易于临床推广应用的精液白细胞过氧化物酶染色检测方法，同时，本发明还提供一种利用该试剂盒测试剂是否有效的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供一种精液白细胞过氧化物酶检测试剂盒，其特征在于，包括A液、B液和HRP质控液；所述的A液是以弱酸性缓冲液与氯化铵、乙二胺四乙酸二钠、正甲苯胺配制成的pH4～7的溶液，浓度为每升A液中含有氯化铵2～100克、乙二胺四乙酸二钠0.5～50克、正甲苯胺0.05～50ml；所述B液是在水或弱酸性缓冲液中加入过氧化氢配制成的pH4～7的溶液，浓度为每升B液中含有过氧化氢10～500ml；所述HRP质控液是在弱酸性缓冲液中加入过氧化物酶的溶液，浓度为每升HRP质控液中含有过氧化物酶0.001～1克。

每升所述A液中含有氯化铵22.727克、乙二胺四乙酸二钠4.545克、正甲苯胺0.205ml；每升所述B液中含有过氧化氢30ml。

每升所述HRP质控液也中含有过氧化物酶0.1克。

所述弱酸性缓冲液为pH4～7、0.01～1mol/L的磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液或醋酸缓冲液或磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或至少其中两种的混合物。

所述A液、B液和HRP质控液中分别加入适量的防腐剂；所述A液为分装于密封容器的多瓶。

同时本发明还提供，利用权利要求1所述精液白细胞过氧化物酶检测试剂盒检测精液标本的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一.取A液，并向A液内加入B液，混匀，A液与B液的体积比为1∶0.005～1∶0.1；

步骤二.再加入完全液化的新鲜的待检精液标本，振荡混匀，精液标本在反应体系内所占体积为2％～20％；

步骤三.在10℃～40℃温度下放置10分钟～120分钟进行反应；

步骤四.振荡混匀后将反应液充入计数池，置于显微镜高倍视野下观察结果并计数，显微镜下观察到的棕色细胞即为过氧化物酶阳性的白细胞。

所述步骤一中A液与B液的体积比为1∶0.028；所述步骤二中精液标本在反应体系内所占体积为10.8％；所述步骤三中在室温下放置20～30分钟进行反应。

所述步骤二之前还包括如下步骤：等待新鲜精液在体外自然液化；或者精液在体外60分钟后仍然不能完全液化时，加入培养液或洗涤液并以吸管反复吹打促进完全液化；液化后的精液标本直接用于步骤二。

所述步骤四之后还有步骤五，将计数结果乘以精液标本稀释倍数，计算计数池内棕色细胞的浓度。

同时本发明还提供，利用所述精液白细胞过氧化物酶检测试剂盒检测试剂是否有效的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一.取A液，并向A液内加入B液，混匀，A液与B液的体积比为1∶0.005～1∶0.1；

步骤二.再加入HRP质控液，振荡混匀，HRP质控液在反应体系内所占体积为2％～20％；

步骤三.在10℃～40℃温度下放置10分钟～120分钟进行反应；

步骤四.将反应液在分光光度计上比色，用纯化水调零，波长520nm，比色光径为1cm；OD_520nm，1cm≥1.0表明试剂有效，OD_520nm，1cm＜1.0表明试剂无效。