[发明专利]一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，其特征在于抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法按以下步骤实现：一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的紫杉醇免疫原免疫Balb/c小鼠，取其效价高且特异性强的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，培养并筛选出具有分泌特异性抗体的细胞株；三、将筛选的细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，获得高浓度的单克隆抗体，即完成抗紫杉醇单克隆抗体的制备；

其中步骤二中免疫Balb/c小鼠：取体重为10～12g的12周龄雌性Balb/c小鼠6只进行免疫；首次免疫采用Taxol-BSA与等量福氏完全佐剂混合，注射器互推法乳化完全后，进行背部皮下多点注射，剂量为每只80μg；3周后进行第二次免疫，以后每隔二周加强免疫一次，换用Taxol-BSA与福氏不完全佐剂等量混合，进行背部皮下多点注射；第三次免疫后，小鼠断尾取血，用间接ELISA法检测血清效价，直至血清效价达到1∶4000～10000；融合前三天，不加佐剂，小鼠尾静脉注射进行强化免疫；

步骤三将筛选的细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，获得高浓度的单克隆抗体的具体步骤如下：取体重为10～12g的12周龄的Balb/c小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂每只0.4mL；7d后每只小鼠腹腔注射5×10⁵个杂交瘤细胞；7～10d，待小鼠腹部明显隆起时，取腹水，2000r/min离心10min去除最上层的脂肪组织，吸取上清分装，冻存于-20℃；采用辛酸-饱和硫酸铵法提纯单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，其特征在于步骤一中紫杉醇人工抗原的合成，采用琥珀酸酐法将购买自Sigma公司的紫杉醇标准品偶联到牛血清白蛋白上制成完全抗原Taxol-BSA，Taxol-BSA偶联物的鉴定采用薄层层析检测法和紫外波长扫描法。