[发明专利]核酸分子MIP3αANA6及其在制备免疫抑制药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物药物领域。具体涉及一些能抑制人MIP3α表达的核酸分子及其在制备免疫抑制药物中的应用。

背景技术

目前免疫排斥反应是各种组织器官移植失败的首要原因，免疫排斥通过树突状细胞和效应细胞起作用，应用免疫抑制剂是其主要的治疗方法，皮质类固醇、环孢素A和他可莫司是较常用的药物，是在免疫应答反应时发挥作用，只能针对效应细胞起作用，因此虽有一定的治疗效果但却效果不佳，对于高危患者，激素治疗常常无效。同时与MIP3α相关的全身其它免疫性疾病：银屑病、类风湿性关节炎、肾小球肾炎、肾小管肾炎、克罗恩氏病和溃疡性结肠炎等的治疗尚未找到特效药。本研究设计并合成的核酸分子, 能特异性地有效抑制人MIP3α基因表达，在免疫应答启动阶段及效应阶段，针对树突状细胞和效应细胞同时起作用，以阻断组织器官的免疫排斥反应，并制备免疫抑制相关药物，有效地治疗与MIP3α相关的全身其它免疫性疾病。核酸分子MIP3αANA6是参考GenBank数据库人CCL20 mRNA（NM_004591）序列，利用美国Ambion公司网站提供的siRNA Target Finder (http:// www. Ambion. com/tehlib/misc/siRNA_finder hml)，根据RNAi设计原则设计，由北京赛百盛生物试剂公司化学合成。

发明内容

本发明的目的是提供了一些用于抑制人MIP3α基因表达的核酸分子。

本发明的另一个目的是提供了上述核酸分子的应用。

本发明的目的是提供了一些用于抑制人MIP3α基因表达的核酸分子，它们具有特异性抑制人MIP3α的表达从而达到免疫抑制的作用，所述核酸分子为双链核酸分子，其DNA序列如下： 

正义链S1：5’-ATATATTGTGCGTCTCCTC-3’；

反义链S2：5’-GAGGAGACGCACAATATAT-3’。

上述核酸分子在本发明中被称为MIP3αANA6。

其中A、T、G、和C分别是腺嘌呤核苷酸、胸腺嘧啶核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和胞嘧啶核苷酸。

在本发明中，术语“核酸分子MIP3αANA6”指具有抑制人MIP3α基因表达，并且含有与S1或/和S2序列高度同源的核酸序列。该术语还包括与S1或/和S2序列的同源性至少70%，较佳地至少80%，更佳地至少90%的核苷酸序列。

该术语还包括S1或S2的核酸序列变异形式。这些变异形式包括（但并不限于）：若干个（通常为1-15个，较佳地1-10个，更佳地1-5个）核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个（通常为10个以内，较佳地为5个以内）核苷酸。例如，S1或S2后（3’ 端）加入若干dT（脱氧胸苷）后形成的序列。

在发明中，MIP3αANA6的序列是S1或/和S2。

或者，在发明中，MIP3αANA6的序列包括S1或/和S2。

本发明还提供了一种重组载体，它含有序列中含有S1和/或S2的核酸分子。

在本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体。例如，选用市售的载体，然后将含有本发明MIP3αANA6核酸序列中含有S1和/或S2，可操作地连接于表达调控区域序列，形成重组载体。例如，可以采用慢病毒、腺病毒及pSUPER等表达载体系统。慢病毒属于逆转录病毒亚属，不仅具有感染分裂靶细胞并整合其基因组中，尤其具有感染多种非分裂细胞能力，因而，慢病毒载体已作为基因转移的有效工具，被广泛应用于基因功能尤其是基因治疗的研究。

本发明中还提供了一种宿主细胞，它含有序列包括中含有S1和/或S2的核酸分子。

在本发明中，术语“宿主细胞”主要是真核哺乳动物细胞。常用的有：293FT细胞，HaCaT细胞，HIEC细胞等。

另一方面，本发明还提供了上述的核酸分子MIP3αANA6的制备方法，即按照MIP3αANA6的序列，将各个核糖核酸分子依次脱水缩合。

本发明的核酸分子MIP3αANA6可以采用各种常规的制备方法制备。本发明的核酸分子MIP3αANA6序列通常可以用人工合成或酶解法的方法获得。

本发明还提供了上述的核酸分子MIP3αANA6在制备抑制人MIP3α的表达的药物中的应用以及在制备免疫抑制药物中的应用。