[发明专利]一种从蝙蝠葛中提取蝙蝠葛碱的方法

说明书

技术领域：

本发明属于中药技术领域，涉及一种天然化学成分的提取纯化方法，具体设计一种从蝙蝠葛中提取蝙蝠葛碱的方法。

背景技术：

生物碱是自然界中广泛存在的一类碱性含氮化合物，是许多中药的有效成分。北豆根中含生物碱约1％以上，北豆根为防己科植物植物蝙蝠葛Menispermum dauricum DC的根茎，产于东北及河北、山东、陕西等地。性味苦寒，有小毒，能清热解毒，祛风止痛，用于治疗咽喉肿痛、肠炎痢疾、风湿痹痛等症。其应用较广，目前的制剂有北豆根片和北豆根胶囊。

蝙蝠葛碱，又名北豆根碱。分子式为C₃₈H₄₄N₂O₆；分子量为624.76；是北豆根中最主要的成分蝙蝠葛生物碱(主要成分为蝙蝠葛碱Dau和蝙蝠葛苏林碱Ds)经研究发现具有较好的抗心肌缺血、保护脑缺血-再灌注损伤的作用、对人肿瘤细胞PC-3、BT5637增值的影响等作用，且副作用小。周际安等报道，蝙蝠葛碱对二磷酸腺苷、肾上腺素和胶原诱导的体外血小板聚集有明显的浓度依赖性和抑制作用。张长元实验发现Dau可通过减轻兔心肌脂质过氧化作用所造成的损伤，增强SOD活性，提高氧自由基清除能力，对兔心肌缺血再灌注损伤具有一定保护作用。Dau可明显抑制由MM-LDL，MM-VLDL诱导的体外培养单核细胞PDGF-B蛋白量的增高，而其作用机理尚未清楚。有研究表明，Dau是一种神经元钙通道阻滞剂，能显著抑制高K⁺去极化引起的突出体“快相”Ca²⁺内流，但不影响基础Ca²⁺内流。近年来还发现Dau具有抗肿瘤作用，对鼻咽癌细胞株具有细胞毒作用，对人白血病细胞HL60和K526有明显抑制细胞生长的作用，并呈浓度依赖性，能使K562/ADM细胞对阿霉素和长春新碱的IC50降低，细胞内阿霉素和柔红霉素的浓度升高，但对K562/ADM细胞膜表面的糖蛋白P-170的量和分布却没有改变。

现有北豆根提取方法有回流法、温浸法等，但回流法容易使有效成分受到破坏，甲醇有毒性。日本学者经氧化铝柱层析才得到北豆根碱，但氧化铝柱层析溶剂消耗量大，只是用于少量分离；沈阳药科大学采用反流分布分离法制备北豆根碱，产率提高到0.43％，但条件不易控制，溶剂消耗量大，操作复杂。

中国专利申请号90102172.5公开了一种“从蝙蝠葛中提取蝙蝠葛碱工艺”，采用酸浸取，用碱碱化，沉淀加苯溶解，用碱萃取，加入氯仿中，用碱洗后，再加苯溶解，重结晶2-3次，加酸溶解，用碱碱化，水洗至中性，低温真空干燥即得产品，该方法提取的产品纯度可达97％，但多次使用氯仿、苯等有毒溶剂，污染严重，有机残留较高，成本高，不利于大生产操作。

中国专利申请号99116493.8公开了“蝙蝠葛提取物及其提取工艺和提取物的应用”，该发明先从蝙蝠葛根茎中得到总碱，经碱化得粗总碱沉淀，再以乙醇提取酚性碱得棕色膏状物，碱溶，过滤，减税溶液加酸中和，滤集沉淀，干燥，得酚性物。该方法所得酚性碱为混合物，所得到的蝙蝠葛碱含量低，反复使用酸碱，对化合物的结构稳定性影响较大。

中国专利申请号200910232812.8公开了“一种蝙蝠葛碱的制备方法”，该方法采用高效逆流萃取法，该方法条件温和，但制备量低，也使用了苯等有毒试剂。

发明内容：

本发明的目的是提供一种安全、成本低、高得率、条件温和的提取蝙蝠葛碱的方法。

本发明的目的是通过如下工艺实现的：

一种从蝙蝠葛中提取蝙蝠葛碱的方法，其特征在于包括以下步骤：将干燥的蝙蝠葛根茎部分粉碎成粗粉，加入乙醇水溶液浸没药材，再渗漉提取至渗漉液生物碱反应为阴性，减压回收乙醇，得流浸膏；将流浸膏加入0.5-10％盐酸溶液溶解，过滤，得酸水液；将酸水液加入阳离子交换树脂柱中，先用去离子水洗脱，再用酸水洗脱，收集洗脱液，加碱液调节pH至7-9，上大孔吸附树脂柱，依次用甲醇水溶液和乙醇水溶液洗脱，将洗脱液减压回收试剂，反复回流溶解重结晶即得蝙蝠葛碱。

所用乙醇浓度为30-60％，浸泡用量以浸没药材药材高出1-2cm为度。

所述上离子柱前加酸液调整药液pH范围为3-4。

所述阳离子交换树脂是强酸性阳离子交换树脂，上样药液浓度为每ml相当于生药1-3g，上样速度为0.3-2BV/h。

所述阳离子树脂柱酸洗脱所用酸为洗脱速度为3-8BV/h。

所述大孔吸附树脂柱洗脱，洗脱剂为50％甲醇和70％乙醇。