[发明专利]一种高车前苷的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种高车前苷的制备方法。

背景技术：

荔枝草，别名雪见草、癞蛤蟆草，为唇形科植物荔枝草(svlvia plebeia r.br.)的地上部分。性凉，味苦、辛。功能主治是清热，解毒，凉血，利尿。主要用于咽喉肿痛、支气管炎、肾炎水肿、痈肿；外治用于乳腺炎、痔疮肿痛、出血等。其中高车前苷是荔枝草的主要功能性成分。

高车前苷，属于黄酮类化合物，易溶于甲醇、乙醇，微溶于丙酮，难溶于水。分子式：C₂₂H₂₂O₁₁，其半水合物为黄色结晶物。本品有抑菌作用，体外对慢性气管炎常见的病原菌白色葡萄球菌、肺炎双球菌等有中等强度的抑制作用，对金黄色葡萄球菌在动物体内感染有一定的对抗作用，可降低死亡率20％。有一定的镇咳、祛痰效果，祛痰能力大于氯化铵，可用于治疗慢性气管炎，且毒性较小。以上药用价值报道显示，高车前苷具有广阔的研究前景。

现有高车前苷的提取工艺主要是醇提、超声提取，乙酸乙酯萃取，硅胶柱、聚酰胺柱色谱、凝胶柱等手段分离纯化。如向兰等发表的“荔枝草中黄酮类成分的研究”，该文献公开的提取方法是醇提，乙酸乙酯萃取，重复聚酰胺柱分离，该方法制备高车前苷周期长，只适于实验室少量制备。此外还有吴斐华等发表的“毛平车前的化学成分和保肝活性”，该文献通过醇提，正丁醇萃取，多次硅胶柱层析、凝胶柱、C-18柱和重结晶的方法制得高车前苷，该方法步骤繁多、操作复杂，不适合大量制备。而现有文献中对从荔枝草中提取高车前苷的研究较少，因此提供一种从荔枝草中提取高车前苷的方法是必要的。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种高车前苷的制备方法。该方法操作简单，产品含量高。

本发明之所以采用高速逆流色谱分离纯化高车前苷，是因为该分离方法操作简便，同时也避免了样品的损失，与传统分离手段相比，克服了其操作繁琐，分离周期长的缺点，并具有制备量大，产品纯度高的优点。

本发明是采用以下技术方案实现的：

一种高车前苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：将荔枝草原料粉碎，加入8～12倍量60-80％乙醇液加热回流提取2～3次，合并提取液，减压回收乙醇，得浓缩液；

2)柱分离：将上述浓缩液适量水稀释滤过，上大孔树脂柱，用乙醇水溶液梯度洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩洗脱液；

3)除杂：将上述浓缩液调节至酸性，滤出沉淀物，用丙酮洗涤，真空干燥得淡黄色粉末；

4)高速逆流色谱分离纯化：以乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂系统，取上相为固定相，下相为流动相，将上述粉末用下相溶解，流出物减压蒸干即得高车前苷产品。

所述步骤2)中的大孔树脂的型号可选AB-8、D1300、HZ-816和LSA-8中的一种，乙醇水溶液梯度为3-5BV20-40％→4-6BV50-70％。

所述步骤3)中调节酸性的可以是盐酸或硫酸的一种，调节pH2～4。

所述步骤4)中的两相溶剂乙酸乙酯∶乙醇∶水的配比4-3∶1∶5。色谱仪转速700～1000r/min，流动相流速1.0～3.0ml/min。

综上所述，本发明存在以下优点：

(1)大孔树脂的处理量大，再生简单，可重复使用；

(2)高速逆流色谱无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

下述实施实例中高车前苷的监测采用薄层色谱法(参照彭苗苗等“荔枝草中高车前苷的提取分离和光谱色谱特征图谱的建立”文献)，具体方法如下：

薄层色谱条件：

薄层板：硅胶G薄层板。

展开剂：氯仿-甲醇(4∶1)

显色剂：1％的AlCl3乙醇液。

展开后(展距10cm)，取出，晾干，喷以1％AlCl₃乙醇液，供试品在与对照品色谱相应的位置上(Rf＝0.48)，有一相同颜色的单一斑点。

实施例1：