[发明专利]一种通过BMP15基因高效快速检测绵羊高繁殖性状的方法

说明书

技术领域

本发明涉及策勒黑羊BMP15基因编码序列上的一个单核苷酸多态性(简称SNP)位点，可作为绵羊高繁殖性状的一个分子标记，建立了判定该SNP位点基因型的检测方法。

背景技术

绵羊属单胎哺乳类动物，但某些绵羊品种却具有稳定的多胎性能。研究认为，BMPR-IB基因，GDF9基因和BMP15基因对控制绵羊多胎性能有重要价值，尤其发现在以上三个基因序列中的碱基改变，可以显著影响绵羊的繁殖性状。FecB基因是在绵羊上发现的第一个多胎主效基因，该基因是BMPR-IB基因上的一个碱基发生突变产生，同样在GDF9和BMP15上也发现能够影响绵羊产羔性能的基因。

在我国的多胎绵羊中，均发现了FecB基因存在并显著影响产羔数，该基因已经作为分子标记在生产实践中广泛应用；但其他多胎主效基因研究还没有明确的结论。本发明研究绵羊多胎主效基因，有助于了解哺乳动物繁殖性状的作用机制，同时可以把多胎主效基因作为分子标记，迅速提高绵羊的繁殖性能。

发明内容

本发明的目的在于：提供的通过BMP15基因高效快速检测绵羊高繁殖性状的方法，对甄别绵羊的繁殖率具有着重要的科学价值，并已得到实践的验证。

本发明的目的是这样实现的：一种通过BMP15基因高效快速检测绵羊高繁殖性状的方法，包括1)在策勒黑羊BMP15基因编码序列中新发现的一个SNP位点，其位点位于Genebank序列(序列号为：NM_001114767.1)从BMP15基因序列的起始密码子ATG开始+755位点，发生了T→C突变(简称T755C)；2)人工合成一对核苷酸序列作为检测T755C位点的引物，其正向引物：5′-gaagaccaaacctctccctaagg-3′；反向引物：5′-tactttcaggcccatcatgctcc-3′；上下游引物长度均为23bp，将其结合到绵羊BMP15基因相应的模板链上，并扩增到含有E+755位点的核酸序列；3)提取DNA，利用引物扩增PCR，将产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，用溴化乙锭染色，以凝胶成像确定已扩增的目的条带；4)利用限制性内切酶Apa I对PCR产物进行消化，消化后用8％丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色，以凝胶成像鉴别该绵羊个体在T755C位点的基因型，将其不同的基因型作为绵羊高繁殖性状的分子标记，用于辅助选择育种；

上步的T755C位点突变后，造成BMP15蛋白的结构和功能发生改变，显著改变了母羊的产羔数；

上步酶切消化产物大小为140bp时，表示该个体没有高繁殖性能；酶切消化产物大小为120bp和140bp两条带时，表示该个体具有高繁殖性能。

所述检测绵羊高繁殖性状的方法，利用限制性内切酶Apa I识别T755C位点，此序列为C时能切开，序列为T时不能被切开。

所述检测绵羊高繁殖性状的方法，获取的BMP15基因T755C位点，因不同基因型个体间具有不同的繁殖性状，其不同的基因型可以作为绵羊高繁殖性状的分子标记。

所述检测绵羊高繁殖性状的方法，实验选用的试剂与药剂均为市售产品。

本发明构思及作用机理：利用DNA序列分析技术对策勒黑羊BMP15基因编码区序列进行了分析，在E+755位点(Genebank序列Access number：NM_001114767.1起始密码子ATG开始+755个碱基)首次发现了碱基T→C的突变(简称T755C)；该核苷酸突变后，造成三联密码子由CTG突变为CCG，从而导致编码亮氨酸的密码子转变为脯氨酸，引起BMP15蛋白结构和功能的改变，并显著影响了母羊的产羔数。

该方法由于E+755位点不同的基因型，可以作为判断绵羊个体是否具有高繁殖性状的一个分子标记；建立的检测该位点的高效快速检测方法，对提高畜牧业种群的繁育及优选有着重要的实用价值，彰显技术进步。

附图说明

本发明对照说明书附图作进一步阐述。

附图1为本方法扩增的PCR产物的电泳图；

如图所示：泳道1为150bp Marker，2-8为PCR产物，大小为140bp

附图2为本方法的内酶切消化后的电泳图；

如图所示：泳道13为100bp Marker，1，2，3，4，5，7，9，10，11，12泳道为140bp，6和8泳道为120bp和140bp

具体实施方式

本发明对照实施例作进一步说明。

一、体外扩增

(1)采集羊外周血液1.5ml，使用肝素纳抗凝，经过冻融和离心后，收集沉淀的白细胞，用酚氯仿抽提的方法提取基因组DNA；