[发明专利]一种快速检测格列苯脲及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测格列苯脲及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法，属于生物学免疫方法的检测技术领域。

背景技术

格列苯脲是磺脲类口服降血糖药，适用于单用饮食控制疗效不满意的轻、中度非胰岛素依赖型糖尿病，病人胰岛B细胞有一定的分泌胰岛素功能，并且无严重的并发症，用于非胰岛素依赖型（成年型、肥胖型）的糖尿病患者。近几年来，一些不法生产企业为牟取暴利，在未经获得批准的情况下，在治疗糖尿病的中药或是保健品中非法加入价格相对低廉、起效快的格列苯脲等降糖西药是十分普遍的现象，据五个省市对市面上销售的32种宣称具有降糖作用中药及中药保健品进行的抽样化验检查发现，70%的药物中都非法添加有降糖西药成分。格列苯脲的降糖作用为甲苯磺丁脲的100-200倍，治疗量范围大，降糖作用 ，半减期12-14小时，维持时间长，易引起低血糖昏迷，特别是老年人。因为老年人摄食少，抗胰岛素激素如胰高血糖素，肾上腺素分泌反应障碍均可诱发低血糖，再者老年人糖尿病性植物神经病变，急性低血糖症状可以被掩盖，低血糖昏迷如持续6小时以上引起大脑功能损害可能是不可逆的，主要是神经元广泛变性、坏死，大小神经胶质细胞浸润。神经系统中大脑皮质、海马回，小脑、尾状核，苍白球处低血糖最为明显。所以格列苯脲必须由医生处方才可使用。在治疗糖尿病的中药或保健产品非法加入格列苯脲而不标明药物成分和剂量，使得医生和患者都无法预知和掌握可能有的毒副作用，极易导致出现药物不良反应；而一些患者往往会在服用医生治疗用处方药的同时服用保健食品，造成摄入过量药物中毒，加剧病情，严重的甚至危及患者生命。所以，为了保证人民群众的饮食用药安全，我们必须加大力度打击这种现象。然而近年来，不法分子非法生产的手段日趋隐蔽，而且由于中药成分比较复杂，检测难度较大，需要精密的分析仪器和专业技术人员，因而造成监管部门监督抽验成本很大，收效却不甚理想。

发明内容

本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种能快速、灵敏、简便地检测格列苯脲衍生物的格列苯脲胶体金层析检测试纸条及制备方法。

本发明是通过以下技术方案来实现：一种快速检测格列苯脲及其衍生物的胶体金层析试纸条，由衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫组成，金标结合垫为吸附格列苯脲衍生物的金标抗体的聚酯纤维毡，在包被膜上有用格列苯脲衍生物偶联的载体蛋白溶液包被直线式检测线T线，和用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线，两条线竖向平行排列。衬板为不吸水的PCV韧性材料。包被膜为硝酸纤维素膜，或混合纤维素膜。吸水垫为植物纤维棉纸。格列苯脲衍生物的金标抗体为胶体金标记的抗格列苯脲衍生物的单克隆抗体复合物，偶联格列苯脲衍生物的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA。

一种快速检测格列苯脲及其衍生物的胶体金层析试纸条的制备方法，制备偶联格列苯脲衍生物的载体牛血清白蛋白BSA，用于制备相应的检测线T线；制备偶联格列苯脲衍生物的载体鸡卵清白蛋白，用于制备单克隆抗体，制备格列苯脲衍生物金标抗体，用于制备吸附格列苯脲衍生物金标抗体的聚酯纤维毡；制备羊抗鼠IgG抗体，用于制备对照线C线，包括如下步骤：

（A）将格列苯脲衍生物与载体牛血清白蛋白BSA/鸡卵清白蛋白OVA进行偶联制备人工合成抗原；

a、生成水溶性碳化二亚胺（EDC）：往反应瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺（DMF）及那非类原料或拉非类原料，并通N₂保护，在室温下进行搅拌，待二甲基甲酰胺（DMF）完全溶解后，快速称取浓度为 60%的氢化钠（NaH），并将其加入所述反应瓶中，搅拌50-70分钟，直至溶液无气泡产生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反应瓶中，注入完毕后，在室温下搅拌11-13小时，之后将反应液倾入水中分散，以氯仿进行提取，合并提取液，以无水Na₂SO₄进行干燥，之后过滤，再经过减压浓缩后得到固体，加入无水乙醚打浆洗涤所述固体，之后进行过滤，最后真空干燥得到新的固体，此固体为烷基化物；将无水乙醇和上述步骤所得的烷基化物加入新的反应瓶中，进行搅拌分散，再加入NaOH溶液，加热回流反应2小时，停止加热稍冷却后，将反应液转入单口瓶中，减压浓缩得糊状物，再加入水，以盐酸调节至pH值为7-9的液体，以氯仿进行提取，合并提取液，再用饱和食盐水洗一次，以无水Na₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩得白色固体，用甲醇重结晶，得白色粉状固体，此固体为水溶性碳化二亚胺（EDC）；