[发明专利]水产品中氨苄青霉素和阿莫西林残留量的高效液相色谱荧光检测法

权利要求书

1. 水产品中氨苄青霉素和阿莫西林残留量的高效液相色谱荧光检测法，其特征在于按下列步骤操作：

（1）.制备标准液   购买氨苄青霉素标准品，含氨苄青霉素(C₁₆H₁₈N₃NaO₄S)不少于96.5%；阿莫西林标准品,含阿莫西林(C₁₆H₁₉N₃O₅S)不少于98.5%;

制备混合标准储备溶液：准确称取氨苄青霉素10.0mg、阿莫西林10.0mg加水溶解并稀释至浓度均为1.0mg/ml的储备液,本溶液于0℃～4℃保存，一周内有效;

 制备混合标准中间溶液：准确移取混合标准储备溶液100μL，用水定容至100mL，配成每升含氨苄青霉素1.0mg、阿莫西林1.0mg的混合标准中间溶液;

 制备混合标准工作溶液：以混合标准中间溶液配制氨苄青霉素标准使用浓度系列：0.1、1.0、5.0、20.0、50.0μg/L；以混合标准中间溶液配制阿莫西林标准使用浓度系列：1.0、5.0、20.0、50.0、100.0μg/L。此标准工作液临用时现配;

   （2）.抽样   本发明提供的检测方法，从原始样品中任意抽取样品，经高速组织捣碎机捣碎。

四分法缩分出不少于500g样品，混匀，均分成两份。装入清洁容器，加封，标明标记。-18℃以下冷冻保存；

（3）.提取   称取5g样品（精确至0.01g）置于50mL聚丙烯离心管中，加入1.68g磷酸二氢钠，加适量水溶解，定容至500mL制备成提取液30mL，以10000r/min均质3min，再于室温下以3000 r/min离心10min，上清液移入离心管中，残留物用20mL提取液同上法均质、离心所得二次上清液，合并二次上清液于离心管中，加入浓度为750 mg/ml三氯乙酸0.5mL，振摇5min，3000 r/min离心10min，上清液做备用液；

（4）.净化   固相萃取小柱预先依次用5mL甲醇、5mL蒸馏水、加入浓度为200 mg/ml三氯乙酸5mL润洗，将备用液过柱，控制速度在20滴/min，依次用浓度为200 mg/ml三氯乙酸5mL和蒸馏水洗涤，真空抽干，再用5mL乙腈洗脱，真空抽干,收集洗脱液于离心管中；

（5）.衍生   洗脱液在40℃下氮气吹干，加0.5mL水溶解或准确量取0.5mL的标准工作液加入浓度为200 mg/ml三氯乙酸0.1mL和7%甲醛溶液0.1mL,旋涡混匀20s，密封，置于沸水浴中加热30 min。取出,冷却至室温,用20%乙腈水溶液定容至1mL；

（6）.过滤   经0.45μm微孔滤膜过滤，供液相色谱测定。