[发明专利]一种天然免疫调节蛋白TRIM38及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，涉及基因表达调控领域，具体是涉及抑制人体干扰素β活化的基因，该基因的制备方法，含有该基因的表达载体，

其编码的蛋白及限定蛋白功能的衍生蛋白，以及所述蛋白制备预防和治疗与人体干扰素β相关的疾病，尤其炎症、自身免疫病和肿瘤的药物上的用途。

背景技术

天然免疫是宿主抵抗病毒感染的第一道防线，也是激活适应性免疫的基础，在宿主清除病毒的免疫反应中具有关键作用，因此成为当前免疫学研究的热点。天然免疫应答是通过模式识别受体识别病原体相关分子模式来启动的。其中维甲酸诱导基因I样受体(Retinoic acid-inducible gene-I like receptors，RLRs)是细胞内识别病毒RNA，诱导天然免疫反应的重要模式识别受体之一。RLRs主要存在于胞浆中，主要包括两个分子：维甲酸诱导基因I(Retinoic acid-inducible gene-I，RIG-I)和黑色素瘤分化相关基因5(Melanomadifferentiation-associated gene-5)，它们与病毒RNA结合之后，构象发生改变，从而募集下游效应分子IFN-β启动子激活因子1(IFN-βpromoter stimulator 1，IPS-1)，引起TBK1/IKKi的激活，进一步引起干扰素调控因子(Interferon transcription factor，IRF)3/7的磷酸化，最终诱导I型干扰素(Type I interferon，I-IFN)、促炎症细胞因子等一系列抗病毒因子的产生。有关RLRs触发的天然免疫应答反应和信号传导过程的调节机制尚不十分清楚，成为近几年研究热点。

TRIM(Tripartite motif protein)家族是一类存在于胞浆中的，含有保守结构域的蛋白质，目前已经发现70多个成员，它们参与细胞增殖、分化、致癌和程序性死亡等很多细胞活动。近年的研究表明，部分TRIM蛋白具有调节免疫信号通路和抗病毒功能，但是目前仅有几个TRIM蛋白的功能得到阐述。

本发明所说的TRIM38具有TRIM蛋白家族典型的结构域特征，主要在细胞质中表达。因此，本领域需要进一步阐明TRIM38在先天免疫信号调节中的功能，深入了解机体抗病毒的免疫机制，开发新的免疫调节药物。

本发明的目的是一种天然免疫调节相关蛋白及其用途。

发明内容

本发明对TRIM38进行了生物信息学分析，通过对其蛋白序列的分析和同源搜索，明确了TRIM38的结构特征及同其他TRIM蛋白成员的关系。分析了TRIM38在细胞中的定位及其结构域的功能。并且通过模式病毒来研究TRIM38与病毒间的关系。同时本发明证明TRIM38有典型的TRIM家族蛋白的结构特征，它能够增加细胞内泛素化，并催化自身泛素化，可能具有E3泛素连接酶功能。

TRIM38还可以抑制RIG-I诱导的IFNβ启动子的激活。通过免疫共沉淀发现TRIM38与RIG-I共存于同一复合物中，二者可以发生相互作用，同时TRIM38与RIG-I的相互作用抑制了其与下游效应分子IPS-1、TBK1的结合，从而抑制干扰素的产生。通过对TRIM38的保守结构域的突变分析，TRIM38的RING结构域对于其抑制干扰素信号通路是必需的。

发明效果

本发明的积极效果在于细胞内证明了TRIM38表达抑制了I型干扰素的活性。干扰TRIM38的表达，病毒感染后I型干扰素的活性明显增强。本发明揭示，TRIM38有望成为治疗免疫疾病的新靶点。

附图说明

图1SeV病毒感染后TRIM38 mRNA转录增加。用SeV病毒感染A549细胞，分别在感染后4h、8h、12h、24h、36h时收获细胞提取细胞总RNA，进行荧光定量PCR检测TRIM38的转录水平。

图2TRIM38在病毒感染后降解。SeV(A)和VSV(B)病毒分别感染A549细胞，6h、12h、24h、36h、48h后，收获细胞，进行Western blot检测。

图3TRIM38对于SeV刺激的IFNβ启动子活性的影响。将PCMV-Flag-TIRM38与PGL3-IFNβ-Luc共转染293T细胞，pRL-SV40作为内参同时转染。24小时后，使用SeV刺激16小时，然后收集细胞，使用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测，图中显示值为萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶的比值。Westernblotting检测转染质粒蛋白的表达，β-actin作为上样对照。